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[摘 要]按照高中《生物》教材中“叶绿体中色素的提取和分离”实验的方法和步骤操作,实验效果不是很理想,而且一些有毒的化学试剂对师生的健康有一定的影响。为此根据我地区的实际情况,在查阅资料的基础上。结合现实的生物学教学实践,对该实验做了改进,解决实际问题。
[关键词]叶绿体色素提取和分离改进
1 实验原理:
叶绿体中的色素都能溶解于有机溶剂中,如:丙酮、酒精等。所以可以用酒精提取叶绿体中的色素。
叶绿体中的四种色素在层析液中的扩散速度不同,溶解度高的扩散得快,溶解度低的扩散得慢。这样,几分钟后,四种色素就因溶解度的不同而在滤纸条上分散开来,形成色素带。
2 实验改进:
2.1 装置的改良
自制简易密闭式色素分离装置(实验装置如下图所示)该分离装置由两部分组成:(1)固定支架(固定了铁夹的铁架台)(2)分离装置(由活塞、盛放层析液的部分、层析液出入口、通气孔四部分组成)
2.2 方法的改进
2.2.1 材料的改进:用校园里的草坪草或三叶草代替菠菜。
2.2.2 研磨的改进:用少许Na2CO3代替CaCO3。
2.2.3 提取液的改进:用无水乙醇替代有一定毒性的丙酮。
2.2.4 层析液的改进:用石油醚:丙酮按10:1的比例配制层析液。
2.2.5 制滤液方法的改进:取消漏斗过滤的方法,改用3-4层纱布包好研磨液挤出滤液的办法过滤。
2.2.6 划滤液细线的改进:划线用具改为细毛笔或软笔。
3 实验演示过程:
3.1 提取色素
称取校园中三叶草4g剪碎放于研钵中,加少量二氧化硅和碳酸钠充分研磨后,再加入无水酒精2ml迅速研磨:然后用一块干净的细纱布叠成3-4层,铺于直径6cm的培养皿上,将研磨后的叶片匀浆倒在纱布上,收拢纱布用力挤捏,即可在培养皿中收集到色深液浓的色素滤液,盖好培养皿盖待用。
3.2 分离色素
3.2.1 制备滤纸条:取一干燥的定性滤纸,将滤纸顺纸纹方向剪成10cm Xlcm的纸条,在纸条的一端1cm处折叠并粘上一小块双面胶,另一端剪去内角。(此过程可由实验员提前准备好。)
3.2.2 划滤液细线:在距端点1处用铅笔划一细线,用软笔蘸滤液画线,重复3-4次,这样就得到了一条滤液线十分清晰的滤纸条。
3.2.3 分离色素:
(1)从分离装置中取出活塞,将滤纸条一端的双面胶撕开,把它粘到分离装置的活塞的中央,垂直放到注射器内(注意不要放的太深)。
(2)把装置侧面的气孔关闭,打开下面软管上的夹子把软管放到装有层析液的试剂瓶内慢慢垂直向上拉动活塞吸取液体。
(3)吸完后关闭夹子,同时打开侧面的气孔慢慢下压活塞直到滤纸下端侵没在层析液中(注意层析液不要超过滤液线)关闭气孔观察。
(4)色素分离后打开两个开关层析液自动会流到试剂瓶中,然后取出活塞取下滤纸条待千后观察。
4 实验效果评价:
(1)自制简易密闭式色素分离装置,此装置用废旧注射器、输液用软管制成,材料易得、制作简单、美观实用。该装置层析液的用量少,当连续有几个班做实验时层析液还可循环利用,节约药品。
(2)提取液用无水酒精,层析液通过多次改进减少了丙酮的用量,省去了毒性较强的苯,色素分离和观察的全过程在密闭装置内进行,防挥发性能强,能有效的防止有毒物质对师生健康的影响。
(3)研磨时用少许Na2CO3代替CaCO3。Na2CO3同样具有保护叶绿体中色素的作用,且有易溶于水的优点,可避免难溶的CaCQ白色粉末加入过多残留在滤液中,影响实验效果。
(4)划线用具改成软笔,滤液自软笔渗出均匀,划出的滤液线细而匀,层析效果更明显。
(5)收取色素液时直接用纱布挤捏,容易收集到滤液,这样就缩短了学生实验的时间,便于学生的观察和思考。
参考文献
[1]曹振.民叶绿体中色素的提取和分离实验的点滴改进
[2]黄 伟.张 梅.叶绿素提取和分离实验的改进
[3]李志刚.宋百敏.叶绿体色素提取、分离实验的难点分析
[关键词]叶绿体色素提取和分离改进
1 实验原理:
叶绿体中的色素都能溶解于有机溶剂中,如:丙酮、酒精等。所以可以用酒精提取叶绿体中的色素。
叶绿体中的四种色素在层析液中的扩散速度不同,溶解度高的扩散得快,溶解度低的扩散得慢。这样,几分钟后,四种色素就因溶解度的不同而在滤纸条上分散开来,形成色素带。
2 实验改进:
2.1 装置的改良
自制简易密闭式色素分离装置(实验装置如下图所示)该分离装置由两部分组成:(1)固定支架(固定了铁夹的铁架台)(2)分离装置(由活塞、盛放层析液的部分、层析液出入口、通气孔四部分组成)
2.2 方法的改进
2.2.1 材料的改进:用校园里的草坪草或三叶草代替菠菜。
2.2.2 研磨的改进:用少许Na2CO3代替CaCO3。
2.2.3 提取液的改进:用无水乙醇替代有一定毒性的丙酮。
2.2.4 层析液的改进:用石油醚:丙酮按10:1的比例配制层析液。
2.2.5 制滤液方法的改进:取消漏斗过滤的方法,改用3-4层纱布包好研磨液挤出滤液的办法过滤。
2.2.6 划滤液细线的改进:划线用具改为细毛笔或软笔。
3 实验演示过程:
3.1 提取色素
称取校园中三叶草4g剪碎放于研钵中,加少量二氧化硅和碳酸钠充分研磨后,再加入无水酒精2ml迅速研磨:然后用一块干净的细纱布叠成3-4层,铺于直径6cm的培养皿上,将研磨后的叶片匀浆倒在纱布上,收拢纱布用力挤捏,即可在培养皿中收集到色深液浓的色素滤液,盖好培养皿盖待用。
3.2 分离色素
3.2.1 制备滤纸条:取一干燥的定性滤纸,将滤纸顺纸纹方向剪成10cm Xlcm的纸条,在纸条的一端1cm处折叠并粘上一小块双面胶,另一端剪去内角。(此过程可由实验员提前准备好。)
3.2.2 划滤液细线:在距端点1处用铅笔划一细线,用软笔蘸滤液画线,重复3-4次,这样就得到了一条滤液线十分清晰的滤纸条。
3.2.3 分离色素:
(1)从分离装置中取出活塞,将滤纸条一端的双面胶撕开,把它粘到分离装置的活塞的中央,垂直放到注射器内(注意不要放的太深)。
(2)把装置侧面的气孔关闭,打开下面软管上的夹子把软管放到装有层析液的试剂瓶内慢慢垂直向上拉动活塞吸取液体。
(3)吸完后关闭夹子,同时打开侧面的气孔慢慢下压活塞直到滤纸下端侵没在层析液中(注意层析液不要超过滤液线)关闭气孔观察。
(4)色素分离后打开两个开关层析液自动会流到试剂瓶中,然后取出活塞取下滤纸条待千后观察。
4 实验效果评价:
(1)自制简易密闭式色素分离装置,此装置用废旧注射器、输液用软管制成,材料易得、制作简单、美观实用。该装置层析液的用量少,当连续有几个班做实验时层析液还可循环利用,节约药品。
(2)提取液用无水酒精,层析液通过多次改进减少了丙酮的用量,省去了毒性较强的苯,色素分离和观察的全过程在密闭装置内进行,防挥发性能强,能有效的防止有毒物质对师生健康的影响。
(3)研磨时用少许Na2CO3代替CaCO3。Na2CO3同样具有保护叶绿体中色素的作用,且有易溶于水的优点,可避免难溶的CaCQ白色粉末加入过多残留在滤液中,影响实验效果。
(4)划线用具改成软笔,滤液自软笔渗出均匀,划出的滤液线细而匀,层析效果更明显。
(5)收取色素液时直接用纱布挤捏,容易收集到滤液,这样就缩短了学生实验的时间,便于学生的观察和思考。
参考文献
[1]曹振.民叶绿体中色素的提取和分离实验的点滴改进
[2]黄 伟.张 梅.叶绿素提取和分离实验的改进
[3]李志刚.宋百敏.叶绿体色素提取、分离实验的难点分析