【摘 要】
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目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,用于定量检测鸡胚流感疫苗中的OVA含量.方法 建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),对该方法的反应条件进行优化,确定定量范围及检测下限,并对重复性、特异性和准确度进行验证.结果 建立的方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为2.5μg/ml和0.5μg/ml,最适封闭液配方为1％BSA+1％蔗糖.该方法的cut-off值为0.134,线性范围为0.313
【机 构】
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650000 昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所
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目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,用于定量检测鸡胚流感疫苗中的OVA含量.方法 建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),对该方法的反应条件进行优化,确定定量范围及检测下限,并对重复性、特异性和准确度进行验证.结果 建立的方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为2.5μg/ml和0.5μg/ml,最适封闭液配方为1％BSA+1％蔗糖.该方法的cut-off值为0.134,线性范围为0.313-20.000ng/ml,定量下限为0.078ng/ml.重复性好,板内变异系数为3.428％ ～25.953％,板间变异系数为5.375％ ～27.614％.特异性好,准确度高,检测结果与试剂盒检测结果符合率为91.43％ ～102.96％.稳定性好,预包被的酶标板冻存于-20℃,半年内检测样本变异系数为1.976％ ～14.409％.结论 建立了快速、简便、低成本的OVA定量检测方法,可用于鸡胚流感疫苗中OVA定量检测.
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