【摘 要】
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目的 探讨DNA聚合酶δ催化亚基基因（POLD1）在增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐受紫杉醇（PTX）抑制其活性及上皮间质转化的作用。方法 细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测PTX抑制MDA-MB-231细胞活性。使用重组慢病毒转染构建POLD1过表达的MDA-MB-231/POLD1-OE及空载对照的MDA-MB-231/POLD-NC细胞株。分设3个组，分别为无处理的MDA-MB-2
【机 构】
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广西医科大学第五附属医院医学实验中心
【基金项目】
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国家自然科学基金（81860341,82060478）； 广西卫生健康委员会自筹经费科研课题（Z20190139,Z20210797）；
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目的 探讨DNA聚合酶δ催化亚基基因（POLD1）在增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐受紫杉醇（PTX）抑制其活性及上皮间质转化的作用。方法 细胞计数试剂盒8（CCK8）法检测PTX抑制MDA-MB-231细胞活性。使用重组慢病毒转染构建POLD1过表达的MDA-MB-231/POLD1-OE及空载对照的MDA-MB-231/POLD-NC细胞株。分设3个组，分别为无处理的MDA-MB-231/POLD-NC细胞（POLD1-NC组）、分别使用PTX刺激的MDA-MB-231/POLD-NC（PTX+POLD1-NC组）及MDA-MB-231/POLD1-OE（PTX+POLD1-OE组）细胞。1μmol/L PTX刺激作用48 h后，通过蛋白质印迹实验检测各组细胞P125（POLD1编码的蛋白）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）及波形蛋白（Vimentin）表达水平；CCK8、Transwell侵袭实验和划痕实验分别检测各组细胞的活性及侵袭迁移能力。结果 CCK8结果显示，不同浓度（0.1、0.5、1、5、10、50μmol/L）的PTX刺激48 h后，细胞的存活率分别为（87.71±2.13）%、（74.13±1.58）%、（56.94±1.21）%、（34.23±0.15）%、（10.55±0.02）%和（1.71±0.09）%,较对照组（0μmol/L）下降，各组数据间总的差异有统计学意义，F=2051.408,P＜0.001。蛋白质印迹实验结果显示，1μmol/L PTX刺激48 h后，与POLD1-NC组相比，PTX+POLD1-NC组细胞的P125、PCNA和Vimentin的表达降低（P值分别为＜0.001、0.007和0.034）,而E-cadherin的表达上升，P=0.026;与POLD1-NC组相比，PTX+POLD1-OE组细胞中PCNA、Bcl-2和Vimentin蛋白表达水平有所降低，但略高于PTX+POLD1-NC组，E-cadherin的表达则略高于POLD1-NC组细胞而略低于PTX+POLD1-NC组，但差异均无统计学意义。CCK8实验结果显示，以POLD1-NC组细胞存活率（100.00±8.83）%为对照，PTX+POLD1-NC组和PTX+POLD1-OE组存活率分别为（48.87±2.41）%和（80.78±5.47）%,总体差异有统计学意义，F=52.749,P＜0.001。其中PTX+POLD1-NC组和PTX+POLD1-OE组存活率较POLD1-NC组降低（P值分别为＜0.001和0.009）,而PTX+POLD1-OE组细胞的存活率高于PTX+POLD1-NC组，P=0.001。Transwell侵袭实验结果显示，POLD1-NC组、PTX+POLD1-NC组及PTX+POLD1-OE组的穿膜细胞数分别为（238.33±12.01）、（122.33±9.07）和（192.67±3.21）个，总体差异有统计学意义，F=129.672,P＜0.001。其中PTX+POLD1-NC组和PTX+POLD1-OE组穿膜细胞数少于POLD1-NC组（P值分别为＜0.001和0.001）,但PTX+POLD1-OE组的穿膜细胞数多于PTX+POLD1-NC组，P＜0.001。划痕实验显示，POLD1-NC组、PTX+POLD1-NC组及PTX+POLD1-OE组细胞的24 h愈合率分别为（30.93±3.05）%、（16.19±2.18）%和（23.47±2.27）%,总体差异有统计学意义，F=25.490,P=0.001。其中PTX+POLD1-NC组和PTX+POLD1-OE组愈合率低于POLD1-NC组（P值分别为＜0.001和0.011）,而PTX+POLD1-OE组的愈合率高于PTX+POLD1-NC组，P=0.012。结论 PTX能够下调MDA-MB-231细胞中POLD1的表达，POLD1的高表达能够增强MDA-MB-231细胞对PTX的耐药性。
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