【摘 要】
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目的 探讨成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)过表达对雄性FVB/N小鼠精子生成的影响及可能机制.方法 构建8只FGF8过表达雄性FVB/N小鼠,于造模后6、11个月各处死4只;10只野生型雄性FVB/N小鼠于造模后6、11个月各处死5只.取睾丸和附睾组织,观察大体形态;应用血细胞计数板计数精子数量,计算FGF8过表达小鼠精子数量占野生型小鼠精子数量的百分比;行HE染色观察睾丸及附睾组织学形态;采用免疫组织化学法检测睾丸组织FGF8、基质金属蛋白酶-2(m
【机 构】
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河南省人民医院生殖中心河南省生殖医院河南省生殖医学工程国际联合实验室郑州大学人民医院,河南郑州 450003;图尔库大学生物医学系,芬兰图尔库 20540
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目的 探讨成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor 8,FGF8)过表达对雄性FVB/N小鼠精子生成的影响及可能机制.方法 构建8只FGF8过表达雄性FVB/N小鼠,于造模后6、11个月各处死4只;10只野生型雄性FVB/N小鼠于造模后6、11个月各处死5只.取睾丸和附睾组织,观察大体形态;应用血细胞计数板计数精子数量,计算FGF8过表达小鼠精子数量占野生型小鼠精子数量的百分比;行HE染色观察睾丸及附睾组织学形态;采用免疫组织化学法检测睾丸组织FGF8、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达.取对数生长期小鼠睾丸支持细胞系 TM4细胞,随机分为 FGF8组(DMEM/F12培养基+25 nmol/L FGF8)、FGFRi 组(DMEM/F12培养基+25 nmol/L FGF8+10 nmol/L FGFRi)、对照组(DMEM/F12培养基),处理48 h,采用实时荧光定量PCR法检测MMP-2 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测MMP-2蛋白相对表达量.结果 FGF8过表达6月龄小鼠精子数量为野生型小鼠的67.5％,11月龄小鼠精子数量为野生型小鼠的25.0％.FGF8过表达6、11月龄小鼠睾丸较野生型小鼠缩小,附睾较野生型小鼠增大.野生型6、11月龄小鼠睾丸组织生精小管上皮细胞排列无明显异常;FGF8过表达6、11月龄小鼠睾丸组织生精小管上皮细胞排列紊乱,退化明显,连续性受损,支持细胞上精子细胞或精子附着明显减少,附睾组织中精子明显减少,且11月龄小鼠较6月龄小鼠睾丸组织生精小管上皮细胞退化更为明显、附睾组织中精子数量明显减少.FGF8过表达6、11月龄小鼠睾丸组织FGF8表达的免疫组织化学评分[(286.3±12.5)、(292.0±2.5)分]、MMP-2表达的免疫组织化学评分[(283.8±18.6)、(288.9±13.5)分]均高于野生型小鼠[FGF8表达的免疫组织化学评分(101.2±11.2)、(114.0±9.6)分,MMP-2表达的免疫组织化学评分(121.0±18.8)、(121.0±8.9)分](P＜0.05).FGF8组 MMP-2 mRNA 及蛋白相对表达量(2.70±0.75、1.11±0.11)均高于对照组(0.90±0.10、0.89±0.08)和FGFRi组(0.53±0.21、0.66±0.04)(P＜0.05),对照组MMP-2 mRNA及蛋白相对表达量与FGFRi组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 FGF8过表达影响小鼠生精过程,FGF8可能通过上调MMP-2表达使精子生成减少.
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