左西孟旦通过调控EGOT/微小RNA-641对缺氧/复氧心肌细胞纤维化的影响

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目的 探讨左西孟旦(Lev)是否通过调控长链非编码RNA(LncRNA)嗜酸性粒细胞个体发育转录本(EGOT)/微小RNA(miR)-641分子轴从而影响缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞增殖、凋亡及纤维化。方法 体外培养大鼠心肌细胞系H9C2,H/R处理细胞建立细胞损伤模型,随机分为对照(control)组、H/R组、H/R+Lev 1μmol/L (H/R+Lev-L)组、H/R+Lev 5μmol/L(H/R+Lev-M)组和H/R+Lev 10μmol/L(H/R+Lev-H)组,每组9例;MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Real-time PCR检测EGOT、miR-641的mRNA表达水平;分别将pcDNA-EGOT、EGOT小分子干扰RNA(si-EGOT)转染至H9C2细胞,采用上述方法检测细胞增殖及凋亡率;双荧光素酶报告基因实验验证EGOT和miR-641的靶向关系;Western blotting检测Bax、Bcl-2、胶原蛋白Ⅰ型(ColⅠ)、胶原蛋白Ⅲ型(ColⅢ)、组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。结果 与control组比较,H/R组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),Bax、ColⅠ、ColⅢ、TIMP2和MMP-2蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),EGOT的表达水平降低(P<0.05),miR-641的表达水平升高(P<0.05);与H/R组比较,H/R+Lev-L组、H/R+Lev-M组及H/R+Lev-H组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax、ColⅠ、ColⅢ、TIMP2和MMP-2蛋白水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平升高(P<0.05),EGOT的表达水平升高(P<0.05),miR-641的表达水平降低(P<0.05),且H/R+Lev-L组、H/R+Lev-M组、H/R+Lev-H组各指标比较差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实EGOT可靶向结合miR-641;转染pcDNA-EGOT与Lev的作用相似;转染si-EGOT可降低Lev对H/R诱导的H9C2细胞增殖、凋亡及纤维化的作用。结论 左西孟旦可能通过上调EGOT表达及下调miR-641表达而促进H/R诱导的H9C2细胞增殖及抑制细胞凋亡、纤维化。
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