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目的
构建通过京尼平(GP)交联有脑源性神经营养因子(BDNF)并携带有人源性脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的复合壳聚糖支架,检测该复合支架对hUC-MSCs的影响,以及hUC-MSCs在复合支架上分化,为创伤性脑外伤(TBI)后利用hUC-MSCs移植进行相关神经修复提供实验基础。
方法通过低温冻干技术制备颗粒状壳聚糖多孔支架,并通过GP在支架上交联BDNF,从而构建出复合壳聚糖支架(简称CGB支架)。检测CGB支架的孔径、孔隙率等理化特征;通过酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测CGB支架上30 d经GP交联的BDNF的释放规律;通过Transwell实验系统研究支架释放的BDNF对神经干细胞(NSCs)分化的影响。
结果细胞计数试剂盒(CCK-8)检测与CGB复合支架共培养的1、3、7、10 d的脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的活性分别为(87.3±6.1)%、(85.9±5.7)%、(86.1±7.5)%、(85.4±3.8)%,与阴性对照组(100.0%)比较差异无统计学意义(P>0.05),与阳性对照组[(52.4±6.3)%、(38.0±2.1)%、(24.6±11.0)%、(11.9±3.5)%]比较差异有统计学意义(P<0.05)。证实hUC-MSCs与CGB支架共培养后第1天的细胞黏附率明显高于其他时间段(P<0.05);支架通过GP交联BDNF后BDNF呈可控的稳定释放,可以持续30 d以上,然而无GP交联剂的支架(CB支架)仅在前3 d释放BDNF;同时,研究证实CGB支架上所释放的BDNF体外能促进NSCs的向神经元的分化。
结论CGB与覆盖在其上的hUC-MSCs具有良好的生物相容性,这为TBI后通过CGB复合支架移植hUC-MSCs提供了可能。