【摘 要】
：
目的 建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证.方法 根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_ 001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR.合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒.以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度.验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测.结果 建立的PCR法可以BPyV-fra
【机 构】
：
中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所,云南昆明650503
论文部分内容阅读
目的 建立牛多瘤病毒(bovine polyomavirus,BPyV)的PCR检测方法,并进行验证.方法 根据NCBI中登录的BPyV主要衣壳蛋白基因序列(BPyV_gp4 VP1,NC_ 001442.1)设计2对引物:9PF、9PR和3PF、3PR.合成BPyV主要衣壳蛋白基因序列,并与pUC57质粒构建重组质粒.以重组质粒为模板进行PCR扩增,优化退火温度.验证方法的灵敏度及特异性,并使用该方法对Vero、MDBK、KMB17和BT细胞的培养上清液进行检测.结果 建立的PCR法可以BPyV-frag重组质粒为模板扩增出特异性条带,最适退火温度为60℃.2对引物的灵敏度均达2fg/,μL(558 copies/μL),引物对9PF、9PR的灵敏度略高于3PF、3PR;引物3PF、3PR和9PF、9PR以高浓度的BPV DNA(101.6 ng/μL)和BAV DNA(97.5 ng/μL)为模板时,均无扩增条带,微量BPyV-frag重组质粒产生扩增条带.Vero、MDBK、KMB17和BT细胞培养上清液中均未检出BPyV.结论 成功建立了BPyV的PCR检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,可用于检测细胞培养上清液中的BPyV.
其他文献
目的 利用液相色谱质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)对重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc二硫键连接进行确认.方法 液相色谱条件为色谱柱:CSHC18(2.1 mm×100 mm,130 (A),1.7μm);流动相A:100％水(含0.1％甲酸);流动相B:100％乙腈(含0.1％甲酸);流速:0.3 mL/min;柱温:65C;上样量:5μL,梯度洗脱.质谱条件:MSE采集模式
摘 要：创客运动在全球范围内的蓬勃发展为教育的改革创新提供了新的契机。嘉兴职业技术学院和正原电气股份有限公司以产学研共同体—正原电气学院为载体，从教学理念、创客空间、创客课程和师资队伍建设等方面着手，探索高职教育校企合作模式下，创新性人才的培养方式。 关键词：创客；校企合作；高职教育 中图分类号：G642.44 文献标识码：A 文章编号：1006-8937（2016）29-0119-02 1
目的 对辽宁省2015-2019年麻疹病毒基因型及流行株血凝素(hemagglutinin,H)基因特征进行分析,为实现消除麻疹目标提供科学依据.方法 对2015-2019年获得的53株麻疹病毒(或原始标本),采用RT-PCR法扩增N基因羧基末端450个核苷酸片段,进行基因定型,并对流行的麻疹毒株H基因全长1854个片段进行核苷酸和氨基酸序列变异分析.结果 2015-2019年辽宁省共检测到H1a、A和D83个基因型病毒,分离到30株麻疹病毒,其中29株为H1a基因亚型,并分为2个分支:Cluster1和
目的 优化4型流感病毒疫苗株H1N1(IVR-215)、H3N2(NIB-121)、BV(BVR-11)、BY(BVR-1B)在稳定表达牛胰蛋白酶原的MDCK细胞(MTY6)和MDCK细胞中的增殖条件,并比较MTY6和MDCK细胞培养不同型别流感病毒的差异.方法 以血凝滴度和病毒滴度[半数组织感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID50)]为指标,通过棋盘法对4型流感病毒疫苗株在MTY6和MDCK细胞上种毒的MOI(10-1、10-2、10-2、10-4
摘 要：电力工程输电线路施工技术对于电力工程来说是非常重要的，对电力工程的施工质量和施工进度起着决定性的影响。文章介绍了电力工程输电线路施工的施工内容，并论述了对电力工程输电线路的施工质量进行控制的技术内容以及对电力工程输电线路进行检修施工的相关技术内容。 关键词：电力工程；输电线路；质量控制 中图分类号：TM726 文献标识码：A 文章编号：1006-8937（2016）29-0162-02
摘 要：文章通过对总包模式下宁德核电调试质量监督的现状和质量监督发现的典型问题进行分析，以提出相应的改进建议，为宁德核电项目以及其他后续调试机组提供参考。 关键词：核电；调试；质量监督 中图分类号：F272 文献标识码：A 文章编号：1006-8937（2016）29-0167-02 1 概 述 核电厂从萌发建设到寿命结束要经历厂址选择、设计、制造、建造、调试、运行和退役几个阶段，每一个阶
卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)目前仍是WHO推荐预防结核病(tuberculosis,TB)的唯一疫苗,对儿童中的结核性脑膜炎及播散性TB具有较好的预防作用,可降低重症TB的风险.虽然新生儿接种BCG效果肯定,但对多数成人肺部疾病的预防作用不一,防治效果差异显著.本文对TB及BCG免疫现状,BCG菌种特性、生产工艺、质量标准、质量风险、接种和接种后异常反应,以及发展现状和发展趋势等方面作一综述,并对BCG的发展及改进提出建议,对BCG的非特异性保护作用及新型TB疫苗的研究
摘 要：当今时代，经济发展非常迅速，国与国之间的交流越来越密切，企业在品牌方面的竞争也越来越激烈。品牌延伸策略在企业的发展中也显得越来越重要，一个好的品牌策略可以为企业创造良好的业绩，而“娃哈哈”品牌就是成功利用品牌延伸策略的知名企业，但它的品牌延伸也并不是没有不足，也有需要改善的地方。 关键词：娃哈哈；品牌延伸策略；评价 中图分类号：F273.4 文献标识码：A 文章编号：1006-8937
目的 对胎盘特异蛋白8(placenta-specific protein 8,PLAC8)的理化性质及其分子结构进行分析,为进一步研究PLAC8的功能及其作用机制提供新的思路和方向.方法 应用ProtParam和Protscale,SignalP,TMHMM,PSORT Ⅱ,OPMA和Conserved Domain,NetNGlyc、YinOYang和Netphos,STRING等软件,分析PLAC8的理化性质、信号肽结构、跨膜结构、亚细胞定位、二级结构和结构域、蛋白翻译后位点修饰以及预测相互作用蛋白
目的 基于双相动力学分析靶向药物联合应用对肝癌细胞SNU-387增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 MTT法检测肝癌细胞SNU-387对11种酪氨酸激酶抑制剂(AZD6244、AZD6482、BGJ-398、BMS-754807、bosutinib、crizotinib、dasatinib、gefitinib、imatinib、sunitinib、HG6-64-1)的敏感性;分别采用单靶点动力学公式和双相动力学公式分析肝癌细胞SNU-387与BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1的相互