【摘 要】
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目的 观察人乳铁蛋白(hLF)对人骨关节炎软骨细胞(HACs)增殖活力及细胞外调节蛋白激酶(ERK)基因表达的影响. 方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测HACs的增殖力,并选择hLF最佳工作浓度；L
【机 构】
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同济大学附属杨浦医院骨外科,Nuffield Department of Orthopaedics,华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科
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目的 观察人乳铁蛋白(hLF)对人骨关节炎软骨细胞(HACs)增殖活力及细胞外调节蛋白激酶(ERK)基因表达的影响. 方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测HACs的增殖力,并选择hLF最佳工作浓度；LIVE/DEAD染色检测HACs的活力；实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫细胞化学染色检测磷酸化细胞外调节蛋白激酶( p-ERK )/ERK的表达.结果 MTT检测显示hLF对HACs的增殖促进作用呈剂量-效应关系(P＜0.05),以200 mg/L为最佳药物浓度.LIVE/DEAD染色显示hLF可以显著促进HACs的活力,与空白对照组和无血清培养组比较,差异有统计学意义[(98.53±2.76)％比(89.12 ±6.98)％比(65.37 ±2.08)％,P＜0.05].Real-time PCR检测显示,hLF作用48 h后ERK mRNA相对表达量为(1.589±0.113),与对照组(1.024±0.026)比较差异有统计学意义(P＜0.05).IN Cell Analyzer 2000定量检测,hLF能够显著促进p-ERK/ERK蛋白的表达,较对照组明显增高,差异有统计学意义[(0.887±0.003)比(0.637±0.002),P＜0.05].结论 hLF可明显促进HACs增殖力和活力,其作用机制可能与上调增殖基因p-ERK/ERK表达有关.
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