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目的
探讨Y-box结合蛋白1(YB-1)在肝癌细胞对索拉非尼耐药中的作用及其可能的机制。
方法分别构建过表达及敲低YB-1的慢病毒载体,单独或联合索拉非尼刺激人肝癌细胞株HepG2、Huh7细胞。过表达部分实验共计分为4组:过表达对照组(Lv-NC)、YB-1过表达组(Lv-YB-1)、过表达对照联合索拉非尼孵育组(Lv-NC sorafenib)、YB-1过表达联合索拉非尼孵育组(Lv-YB-1 sorafenib)。敲低部分实验也分为4组:敲低对照组(Lv-shNC)、YB-1敲低组(Lv-shYB-1)、敲低对照联合索拉非尼孵育组(Lv-shNC sorafenib)、YB-1敲低联合索拉非尼孵育组(Lv-shYB-1 sorafenib)。末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记染色检测细胞凋亡的发生情况,蛋白质印迹法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的关键蛋白磷酸化(p)-ERK、ERK的蛋白表达水平,并通过ImageJ软件进行定量分析。进行裸鼠皮下成瘤实验,并予索拉非尼治疗,在体内验证YB-1对索拉非尼疗效的影响。2组数据之间的比较采用独立样本t检验;3组及以上数据间的比较应用单因素方差分析。
结果索拉非尼可以促进肝癌细胞凋亡的发生,而过表达YB-1抑制细胞凋亡,同时还可以抵抗索拉非尼对凋亡的促进作用;相反,敲低YB-1可促进细胞凋亡,还可以增强索拉非尼对细胞凋亡的诱导作用。此外,索拉非尼孵育可下调p-ERK的水平(HepG2: Lv-NC 0.685±0.143,Lv-NC sorafenib 0.315±0.168,P