【摘 要】
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目的从小鼠肝脏组织中克隆神经营养因子NT3基因,在此基础上构建能稳定表达NT3的MESPU35细胞株.方法RT-PCR扩增目的基因,克隆入穿梭载体pExchange-1neo,酶切及测序鉴定.重组载
【机 构】
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第三军医大学基础医学部,第三军医大学基础医学部
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目的从小鼠肝脏组织中克隆神经营养因子NT3基因,在此基础上构建能稳定表达NT3的MESPU35细胞株.方法RT-PCR扩增目的基因,克隆入穿梭载体pExchange-1neo,酶切及测序鉴定.重组载体转染MESPU35胚胎干细胞株,G418长期筛选,RT-PCR检测转染细胞NT3水平.结果RT-PCR得到长度为777bp的基因片段,克隆后酶切鉴定正确,测序结果经BLAST对比,与GenBank中小鼠NT-3序列完全一致.成功构建了NT3真核表达载体及高表达细胞株.结论从小鼠肝脏组织中PCR克隆了正确的NT
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