【摘 要】
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目的观察mTOR信号通路中上游调控蛋白Rheb对脂肪细胞分化的影响。方法构建Rheb(Ras homologenriched in brain)的重组质粒(pCAG-Insulator-Rheb),并将其注射到B6小鼠的胚胎内
【机 构】
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第二军医大学长征医院内分泌科,南京医科大学代谢疾病研究中心,
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目的观察mTOR信号通路中上游调控蛋白Rheb对脂肪细胞分化的影响。方法构建Rheb(Ras homologenriched in brain)的重组质粒(pCAG-Insulator-Rheb),并将其注射到B6小鼠的胚胎内,产生全身高表达Rheb的转基因小鼠。提取怀孕雌鼠第13.5天的胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast cells,MEFs),PCR鉴定基因型之后进行成脂诱导分化。通过检测分化第12天MEFs内三酰甘油的含量、油红O染色的结果、实时定量PCR方法检测脂肪细胞特异性转录因子PPARγ和C/EBPα的表达情况,来观察Rheb在脂肪细胞分化过程中的作用。结果成功构建了全身高表达Rheb的转基因小鼠模型,并且检测到在高表达Rheb后,可以促进MEFs内脂滴的生成,三酰甘油含量增高,油红O染色有明显区别,并且脂肪细胞特异性转录因子PPARγ和C/EBPα的表达量均升高。结论 Rheb过表达以后可以促进脂肪细胞的分化。
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