目的确定一种适用于同时测定肠内容物、血清等生物样本中短链脂肪酸（Short chain fatty acids，SCFAs）及乳酸含量的方法。方法 通过检测小鼠粪便中SCFAs及乳酸含量，本文对比分析气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）、衍生化反应后液相色谱法（衍生化-LC），确定最优检测方法进行方法学验证，并应用于分析肠内容物、血清等生物样本。结果GC法可快速检测乙酸、丙酸、丁酸、戊酸，但不能同时检测乳酸；LC法杂峰多，检测乙酸含量误差大，准确度不高；衍生化-LC法检测范围广，可同时检测肠内容物与血清中乳酸及5种SCFAs含量，样品色谱图杂峰少，各组分分离度高，方法精确度高，各组分测定的变异系数CV≤8.87%。结论相比GC法和LC法，在同时检测肠内容物与血清等生物样本SCFAs及乳酸含量方面，衍生化-LC法更具技术优势，更能有效满足在当前迅猛发展的微生物组学、代谢组学的复杂样品中对SCFAs及乳酸含量准确地分析应用需求。