分子伴侣基因的克隆及表达

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xuyingheng
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用聚合酶链反应(PCR)方法从大肠杆菌染色体DNA中扩增得到2 000bp的DNA片段(含GroES和GroEL),并克隆到PGEM3zf(+)载体中,经限制性图谱分析和部分DNA序列测定,证实2 000bp的PCR产物为GroE基因全部编码序列。将PCR产物构建在PLPR启动子控制下的pBV220表达质粒中,转入大肠杆菌DH5 α,经42℃热诱导,获得GroE基因的表达产物,在SDS-PAGE上出现分子量约60 000 (GroEL)及15 000的蛋白带(GroES),经密度扫描分析,前者约占细菌总蛋白的30%,后者占28%。经鉴定GroES和GroEL基因表达产物在细胞内形成可溶性蛋白。

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经戊二醛醛化的鹅血球做肾综合征出血热病毒(HFRSV)的血凝抑制试验(HI),对HFRS病人血清进行分型,与新鲜鹅血球相比较,符合率为98.4%;其醛化血球反复冰融后,血球完整不裂解;在4℃或-30℃保存1年与HFRSV的血凝素凝集效价未下降,适于制成试剂盒应用。
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乙型肝炎病毒(HBV)前C区A83点突变使HBeAg消失,而病毒复制和病变活动持续,这一变异毒株相当多见。为建立一种较简易的检测方法,我们设计一种针对A83变异株的错配引物,通过聚合酶链反应(PCR)扩增,可在A83变异株的扩增片段里引进Bsu36 I限制酶位点(错配PCR),然后将扩增片段(102bp)用该酶消化,含变异株者电泳分析-82bp片段,经测序验证结果完全符合。
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通过病因学,血清学和流行病学研究,弄清了近期我国马群中类流感疾病流行的病因为马2(H3N8)亚型流感病毒。采用多克隆和单克隆抗体对分离物进行抗原性分析,结果提示,从我国马群中分离到的流感病毒株是马2 (H3N8)亚型流感病毒,它绝然不同于过去我们发现的禽的H3N8流感病毒。估计它是近期内从国外马群传入我国。
对先天肾积水的病因研究以前主要着重于解剖和病理学方面。我们应用聚合酶链反应(PCR)技术直接检测手术中从肾盂内取的尿液及肾盂输尿管连接处的病变组织,结果25例患儿11例检测出巨细胞病毒(CMV)。对照组6例检测结果全部为阴性。二者经统计学处理结果有显著性差异(P>0.05)。提示CMV感染可能是引起先天肾积水的原因之一。