【摘 要】
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目的 检测非酒精性脂肪肝病（NAFLD）模型小鼠的肝脏病理变化，并探索一种获得大量高活性、高纯度的NAFLD小鼠原代肝细胞的实验方法。方法 60只小鼠随机分为正常组（正常饲料，CD）和高脂组（高脂饲料，HFD）,分饮食饲养20周。定期检测小鼠的体质量，苏木精-伊红（HE）染色和天狼猩红染色观察肝脏组织病理特点。高脂饮食15周时，原位灌注Ⅳ型胶原酶6～8 mL消化得到混合肝细胞，铺于40%的Perc
【机 构】
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中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室
【基金项目】
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国家重点研发计划（2019YFA0801800）；
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目的 检测非酒精性脂肪肝病（NAFLD）模型小鼠的肝脏病理变化，并探索一种获得大量高活性、高纯度的NAFLD小鼠原代肝细胞的实验方法。方法 60只小鼠随机分为正常组（正常饲料，CD）和高脂组（高脂饲料，HFD）,分饮食饲养20周。定期检测小鼠的体质量，苏木精-伊红（HE）染色和天狼猩红染色观察肝脏组织病理特点。高脂饮食15周时，原位灌注Ⅳ型胶原酶6～8 mL消化得到混合肝细胞，铺于40%的Percoll分离液上，进行密度梯度离心获得纯化的肝细胞，锥虫蓝染色确定细胞的活性，显微镜观察其形态。结果 随着建模时间的延长，HFD组小鼠的体质量逐渐增加，且增幅显著高于CD组；HFD组小鼠肝脏脂肪变性程度增加，在第20周伴随出现了纤维化；建模15周时，每只NAFLD小鼠可获得5×10~7～7×10~7个肝细胞，细胞存活率≥85%,细胞纯度≥95%,细胞呈圆形或椭圆形，其边缘平滑，且聚团少；通过精准控制温度、降低胶原酶浓度、使用低速离心和低速密度梯度离心等优化条件后，获得的细胞数量和质量均有显著提高。结论 成功构建了NAFLD小鼠模型，并揭示了不同疾病阶段肝脏的病理特点。探索了一种高效、稳定的获取NAFLD小鼠原代肝细胞的方法。所得肝细胞的数量和活性都符合大多数实验的要求。
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