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目的
探讨血管内皮生长因子小分子干扰RNA(VEGFsiRNA)体外实验对缺氧视网膜微血管内皮细胞(RMECs)的影响。
方法原代培养未足月胎儿的视网膜微血管内皮细胞,用氯化钴模拟缺氧生长状态。设计、合成VEGFsiRNA并转染缺氧培养的细胞,分为VEGFsiRNA转染组(实验组)、缺氧组(空白对照组)和阴性siRNA转染组(阴性对照组),用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染前后VEGF表达的变化,噻唑蓝比色法(MTT法)观察细胞的生长增殖情况。
结果转染VEGFsiRNA-脂质体复合物后24 h、48 h、72 h,hRMECs VEGFmRNA表达水平较对照组分别下降21.05%、79.67%和90.48%,hRMECs VEGF蛋白的表达水平较对照组分别下降14.58%、66.97%和81.61%。转染后12 h、24 h、48 h及72 h hRMECs的增殖分别被抑制达15.0%、42.9%、78.3 %和65.9%。
结论VEGFsiRNA能下调未足月胎儿缺氧视网膜微血管内皮细胞VEGF的表达,抑制视网膜微血管内皮细胞增殖,是基因治疗早产儿视网膜病变的一个研究方向。