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探讨结核分枝杆菌rv1057基因受到双组份信号转导系统MprAB和TrcRS协同调控的作用机制。
方法采用凝胶阻滞迁移试验分析MprA和TrcR在体外与目标基因启动子片段的特异性结合能力;荧光定量PCR检测目标基因的转录水平,以H37Rv SDS处理组的表达值为1个单位进行倍数变化分析;蛋白质免疫印迹法检测目标基因的表达;通过构建lacZ报告基因检测rv1057启动子不同区域启动转录的能力。统计学处理采用t检验。
结果MprA结合trcR启动子;无SDS条件下D981、H37Rv菌株的trcR相对表达量分别为H37Rv SDS处理组的1.7和2.5倍,差异有统计学意义(t=18.54,P<0.05);有SDS条件下,D981、H37Rv菌株的trcR相对表达量分别为H37Rv SDS处理组的1.0和2.1倍,D981菌株的trcR转录水平显著高于H37Rv菌株,差异有统计学意义(t=15.86,P<0.05)。H37Rv菌株培养过程中加入SDS后trcR的相对表达量变化倍数显著下降,差异有统计学意义(t=16.99,P<0.05);MprA和TrcR都可以结合rv1057启动子并调控其表达;MprA激活rv1057的转录,而TrcR阻遏rv1057的转录。
结论MprAB和TrcRS协同调控rv1057基因的表达,环境存在SDS时MprA被激活,阻碍trcR表达并激活rv1057的转录,而无SDS时TrcR阻遏rv1057的转录。