论文部分内容阅读
【摘 要】目的：探讨结直肠癌组织中P53，β-catenin和人表皮生长因子受体-2（HER-2）的表达及与临床病理特征的关系。方法：应用免疫组化SP法检测70例结直肠癌组织中P53、β-catenin及HER-2表达，并结合临床病理特征进行分析。结果：HER-2的阳性表达率為18.6%，其表达与肿瘤分化、Dukes分期有关（P<0.05）；P53阳性表达率为74.3%，β-catenin为68.6%，两者的表达均与肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关（P<0.05）。P53的表达与HER-2、β-catenin间有相关关系（P<0.05）。结论：P53、β-catenin及HER-2参与结直肠癌的发生、发展，联合检测有助于指导结直肠癌的治疗和预后评估。
【关键词】结直肠癌；P53；β-catenin；HER-2
【中图分类号】R737.11 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）05-2881-01
结直肠癌的发病率逐年上升，是发达国家的第3大常见消化系统恶性肿瘤，位居癌症死亡原因的第2位[1]。临床上主要采用手术为主的综合治疗，但效果并不理想。本研究检测70例结直肠癌P53、β-catenin及HER-2的表达，探讨它们与临床病理特征的关系及其三者之间的相互关系，为结直肠癌的临床诊断、靶向治疗及预后评估提供分子生物学参考指标。
1 材料与方法
1.1 临床资料 收集本院 2009年1月～2012年12月结直肠癌根治术标本70例，均经病理确诊为结直肠癌，术前均未接受过放化疗及其他针对肿瘤的治疗。本组男38例，女32例，年龄25～81 岁，平均年龄58岁，肿瘤最大径1.5～7.3cm，平均4.3cm。按WHO分类：管状腺癌（高、中分化型）44例，低-未分化腺癌26例。按Dukes分期：A+B期31例，C+D期39例；淋巴结转移33例。
1.2 方法 标本均经甲醛固定、石蜡包埋，HE染色。免疫组织化学采用SP法，鼠抗人P53、β-catenin、HER-2单克隆抗体及SP试剂盒均购于北京中杉金桥公司，以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定 ①HER-2大多数为胞质内表达，部分包膜表达。②β-catenin染色结果判断标准参照Maruyama等[2]的方法，﹥70%细胞膜染色阳性为正常表达，细胞膜表达缺失及﹥10%细胞质和（或）细胞核阳性表达者为阳性。③P53阳性表达定位于细胞核。三者出现棕黄色颗粒为阳性细胞，按照阳性细胞占细胞总数的百分比分为四个等级：无着色或阳性细胞数<10%的为阴性（-）， 10%～50%的为弱阳性（+）， 50%～75%的为阳性（++）， >75%的为强阳性（+++）。
1.4统计学分析 采用 SPSS 17.0统计软件，组间比较采用χ2检验，等级资料采用趋势χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 70例患者P53、β-catenin及HER-2表达的阳性率分别为74.3%、68.6%及18.6%，P53的表达最高，HER-2最低。
2.2 三种基因在结直肠癌中的表达与临床病理参数的关系
HER-2在结直肠癌组织中的表达与肿瘤分化、Dukes分期有关（P<0.05）；P53、β-catenin与肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关（P<0.05）。而三者与患者的性别、年龄 及肿瘤大小均无关（P>0.05） 。低-未分化癌的结直肠癌病例阳性表达明显高于高-中分化。
2.3 P53与HER-2、β-catenin表达的相关关系
P53与HER-2和β-catenin表达的相关性：P53的表达与HER-2和β-catenin的表达间有相关关系，P53的表达与HER-2、β-catenin呈正相关（χ2=12.38，p<0.05），与β-catenin亦呈正相关（χ2=16.35，p<0.05）。
3 讨论
结直肠癌的发生发展是一个多因素，多基因共同作用的复杂的生物学过程，涉及多个基因的激活或失活。
HER-2原癌基因位于17号染色体长臂（17q21），编码p185跨膜糖蛋白，主要参与抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞生长、侵袭、转移[3]。其阳性表达广泛存在于乳腺癌、胃癌、结直肠癌、肺癌等肿瘤中，并发现其异常扩增或者过度表达均对肿瘤的治疗和预后有着明显的相关性。目前，HER-2及其靶向治疗在临床上主要用于乳腺癌，而在结直肠癌中的研究仍缺乏有力的证据。一些研究显示，HER-2在结直肠癌中的阳性表达率较低，与Dukes分期有关，可作为结直肠癌患者的一个独立预后因素，可能预示其对曲妥珠单抗（ Herceptin）治疗有效[4]。其表达不同于在乳腺癌组织中，主要定位于胞质，部分包膜表达。本研究结果显示：HER-2的阳性表达率为18.6%，与肿瘤的分化、Duck，s分期有关。表明HER2过表达对结直肠癌的分化程度及预后有重要意义。尽管HER-2在结直肠癌中表达率较低，但其过表达者仍可尝试用抗HER-2的靶向药物曲妥珠单抗（ Herceptin）治疗[4]，但对其疗效仍需进一步研究。
β-catenin是一种多功能蛋白，与跨膜蛋白E-cadherin形成复合物，参与细胞间的黏附且为Wnt信号通路的构成蛋白之一。90%以上的结直肠癌存在Wnt/β-catenin信号转导通路的异常激活以及继发于此的β-catenin蛋白在细胞内的积聚、核异位及其依赖性靶基因的激活，诱导细胞进入增殖期导致肿瘤发生，并常引起肿瘤浸润、转移[5]。P53 是肿瘤抑制基因，突变型P53是结直肠癌组织中公认的分子水平改变，可作为一种独立可靠的生物学指标来判断患者的预后[6]。本研究结果显示：β-catenin的阳性表达率为68.6%，P53为74.3%，两者均与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关，提示β-catenin及P53在结直肠癌的发生发展中起重要作用。本研究结果还显示P53与β-catenin、HER-2之间的表达均呈正相关，其具体的相互作用机制有待进一步研究。
【关键词】结直肠癌；P53；β-catenin；HER-2
【中图分类号】R737.11 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）05-2881-01
结直肠癌的发病率逐年上升，是发达国家的第3大常见消化系统恶性肿瘤，位居癌症死亡原因的第2位[1]。临床上主要采用手术为主的综合治疗，但效果并不理想。本研究检测70例结直肠癌P53、β-catenin及HER-2的表达，探讨它们与临床病理特征的关系及其三者之间的相互关系，为结直肠癌的临床诊断、靶向治疗及预后评估提供分子生物学参考指标。
1 材料与方法
1.1 临床资料 收集本院 2009年1月～2012年12月结直肠癌根治术标本70例，均经病理确诊为结直肠癌，术前均未接受过放化疗及其他针对肿瘤的治疗。本组男38例，女32例，年龄25～81 岁，平均年龄58岁，肿瘤最大径1.5～7.3cm，平均4.3cm。按WHO分类：管状腺癌（高、中分化型）44例，低-未分化腺癌26例。按Dukes分期：A+B期31例，C+D期39例；淋巴结转移33例。
1.2 方法 标本均经甲醛固定、石蜡包埋，HE染色。免疫组织化学采用SP法，鼠抗人P53、β-catenin、HER-2单克隆抗体及SP试剂盒均购于北京中杉金桥公司，以磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定 ①HER-2大多数为胞质内表达，部分包膜表达。②β-catenin染色结果判断标准参照Maruyama等[2]的方法，﹥70%细胞膜染色阳性为正常表达，细胞膜表达缺失及﹥10%细胞质和（或）细胞核阳性表达者为阳性。③P53阳性表达定位于细胞核。三者出现棕黄色颗粒为阳性细胞，按照阳性细胞占细胞总数的百分比分为四个等级：无着色或阳性细胞数<10%的为阴性（-）， 10%～50%的为弱阳性（+）， 50%～75%的为阳性（++）， >75%的为强阳性（+++）。
1.4统计学分析 采用 SPSS 17.0统计软件，组间比较采用χ2检验，等级资料采用趋势χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 70例患者P53、β-catenin及HER-2表达的阳性率分别为74.3%、68.6%及18.6%，P53的表达最高，HER-2最低。
2.2 三种基因在结直肠癌中的表达与临床病理参数的关系
HER-2在结直肠癌组织中的表达与肿瘤分化、Dukes分期有关（P<0.05）；P53、β-catenin与肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关（P<0.05）。而三者与患者的性别、年龄 及肿瘤大小均无关（P>0.05） 。低-未分化癌的结直肠癌病例阳性表达明显高于高-中分化。
2.3 P53与HER-2、β-catenin表达的相关关系
P53与HER-2和β-catenin表达的相关性：P53的表达与HER-2和β-catenin的表达间有相关关系，P53的表达与HER-2、β-catenin呈正相关（χ2=12.38，p<0.05），与β-catenin亦呈正相关（χ2=16.35，p<0.05）。
3 讨论
结直肠癌的发生发展是一个多因素，多基因共同作用的复杂的生物学过程，涉及多个基因的激活或失活。
HER-2原癌基因位于17号染色体长臂（17q21），编码p185跨膜糖蛋白，主要参与抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞生长、侵袭、转移[3]。其阳性表达广泛存在于乳腺癌、胃癌、结直肠癌、肺癌等肿瘤中，并发现其异常扩增或者过度表达均对肿瘤的治疗和预后有着明显的相关性。目前，HER-2及其靶向治疗在临床上主要用于乳腺癌，而在结直肠癌中的研究仍缺乏有力的证据。一些研究显示，HER-2在结直肠癌中的阳性表达率较低，与Dukes分期有关，可作为结直肠癌患者的一个独立预后因素，可能预示其对曲妥珠单抗（ Herceptin）治疗有效[4]。其表达不同于在乳腺癌组织中，主要定位于胞质，部分包膜表达。本研究结果显示：HER-2的阳性表达率为18.6%，与肿瘤的分化、Duck，s分期有关。表明HER2过表达对结直肠癌的分化程度及预后有重要意义。尽管HER-2在结直肠癌中表达率较低，但其过表达者仍可尝试用抗HER-2的靶向药物曲妥珠单抗（ Herceptin）治疗[4]，但对其疗效仍需进一步研究。
β-catenin是一种多功能蛋白，与跨膜蛋白E-cadherin形成复合物，参与细胞间的黏附且为Wnt信号通路的构成蛋白之一。90%以上的结直肠癌存在Wnt/β-catenin信号转导通路的异常激活以及继发于此的β-catenin蛋白在细胞内的积聚、核异位及其依赖性靶基因的激活，诱导细胞进入增殖期导致肿瘤发生，并常引起肿瘤浸润、转移[5]。P53 是肿瘤抑制基因，突变型P53是结直肠癌组织中公认的分子水平改变，可作为一种独立可靠的生物学指标来判断患者的预后[6]。本研究结果显示：β-catenin的阳性表达率为68.6%，P53为74.3%，两者均与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有关，提示β-catenin及P53在结直肠癌的发生发展中起重要作用。本研究结果还显示P53与β-catenin、HER-2之间的表达均呈正相关，其具体的相互作用机制有待进一步研究。