【摘 要】
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目的比较中国仓鼠卵巢细胞(CHO)工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾
【机 构】
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安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室,安徽安科生物工程集团股份有限公司
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目的比较中国仓鼠卵巢细胞(CHO)工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量:酸水解释放出的唾液酸用荧光试剂1,2-diamino-4,5-methylenedioxybenzene(DMB)衍生后,采用荧光-亲水保留液相色谱(HILIC-FLD)检测。寡糖链的结构分析:糖苷酶PNGase F释放出的寡糖链经邻氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生后,一部分利用阴离子交换色谱原理分析寡糖链上唾液酸的平均数;一部分经HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖链指纹图谱。结果 6株工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸含量在3~12 mol NANA/mol蛋白之间,参考品Aflibercept为10.46 mol NANA/mol蛋白;每个寡糖链的唾液酸平均数在0.28~1.0之间;寡糖链的特征指纹谱图显示VEGFR-Fc有12个共有峰,各样品、参考品均有以上共有峰,但各峰的峰高有差异。结论不同的CHO工程细胞株所表达的糖蛋白的唾液酸化程度存在差异。
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