【摘 要】
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目的比较氟尿苷 (FUDR) 耐药的绒毛膜癌 (绒癌) 细胞系JeG-3/FUDRA细胞和其亲本细胞系JeG-3细胞 (FUDR敏感) 之间表达差异的蛋白质,探讨其在绒癌耐药发生中的作用。方法采用双向差异凝胶电泳 (2-DE) 技术筛选JeG-3/FUDRA细胞和JeG-3细胞之间表达差异的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF-MS) 技术鉴定差异表达的蛋白质。利用靶基因
【机 构】
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苏州大学附属第一医院妇产科 215006｜100730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科｜100730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院妇产科｜100730 中国医学科学院北京协
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目的比较氟尿苷 (FUDR) 耐药的绒毛膜癌 (绒癌) 细胞系JeG-3/FUDRA细胞和其亲本细胞系JeG-3细胞 (FUDR敏感) 之间表达差异的蛋白质,探讨其在绒癌耐药发生中的作用。
方法采用双向差异凝胶电泳 (2-DE) 技术筛选JeG-3/FUDRA细胞和JeG-3细胞之间表达差异的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF-MS) 技术鉴定差异表达的蛋白质。利用靶基因功能的显著性 (GO) 分析和途径 (Pathway) 分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选,筛选出目的蛋白质。蛋白印迹法验证JeG-3/FUDRA细胞中目的蛋白质的表达;小分子干扰RNA (siRNA) 干扰JeG-3/FUDRA细胞中目的蛋白质的表达后,观察其耐药性的变化。
结果2-DE技术检测显示,在JeG-3/FUDRA细胞和JeG-3细胞中共筛选出46个差异表达的蛋白质,并经MALDI-TOF-MS技术鉴定证实其均为差异表达的蛋白质点;通过GO分析和Pathway分析方法对差异表达的蛋白质进行分析和筛选后发现,内质网蛋白质折叠分子伴侣钙网蛋白 (CALR) 、蛋白二硫异构酶A3 (PDIA3) 和相对分子质量为78 000的葡萄糖调节蛋白 (GRP78) 在耐药细胞中表达均明显增高。蛋白印迹法检测显示,JeG-3/FUDRA细胞中CALR、PDIA3、GRP78蛋白的表达强度明显高于JeG-3细胞。干扰JeG-3/FUDRA细胞中CALR和PDIA3基因的表达后,JeG-3/FUDRA细胞的耐药性分别下降了76.3% (干扰前后分别为36.7±2.0和8.7±3.1,P<0.05) 和51.4% (干扰前后分别为36.7±2.0和17.8±1.2,P<0.05) 。
结论内质网蛋白质折叠分子伴侣CALR、PDIA3、GRP78很可能参与了绒癌细胞FUDR耐药的发生。
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