【摘 要】
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目的克隆人NT-3 cDNA基因,构建pIRES2-EGFP-NT3. 方法用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人新鲜的肝脏手术标本提取总RNA,并经反转录PCR获得NT3-cDNA. 将质粒pUC19双酶切并纯化回
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目的克隆人NT-3 cDNA基因,构建pIRES2-EGFP-NT3. 方法用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法从人新鲜的肝脏手术标本提取总RNA,并经反转录PCR获得NT3-cDNA. 将质粒pUC19双酶切并纯化回收大片段,与纯化后的NT3-cDNA连接构成pUC-NT3-cDNA,转化大肠杆菌XL10,挑选白色克隆作酶切鉴定、测序. 将测序正确pUC-NT3-cDNA及pIRES2-EGFP分别双酶切,前者回收774 bp的片段并纯化,后者纯化回收大片段,将回收的774 bp片段与纯化的大片段连接成pIRE
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