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采用制备型液相色谱从药用级生物素样品中分离纯化出3个有关物质,通过MS、NMR(包括1H NMR,H-HCOSY,NOESY,13C NMR,DEPT,HSQC和HMBC)、FT-IR和UV进行表征,确定3个有关物质分别为表生物素、氨甲酰基生物素和苄胺甲酰基生物素,后两者为本文首次报道的化合物。该研究为生物素的质量研究提供了有关物质对照品,对其生产技术改进具有一定指导意义。