【摘 要】
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目的 观察日本血吸虫感染小鼠肝组织髓样细胞触发受体-1 (TREM-1)的动态表达,分析TREM-1与巨噬细胞M1极化的相关性.方法 34只C57BL/6小鼠随机分为对照组(10只)和感染组(24只),对照组小鼠不作任何处理,取肝组织;感染组每鼠经腹部皮肤接种日本血吸虫尾蚴(15±2)条,感染后第3、6、9和12周,各取6只小鼠的肝组织.实时荧光定量PCR检测对照组、各时间点感染组小鼠肝组织中TREM-1和白细胞介素-1β (IL-1β) mRNA的相对转录水平;蛋白质免疫印迹(Western blott
【机 构】
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南通大学医学院病原生物学系,南通226001
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目的 观察日本血吸虫感染小鼠肝组织髓样细胞触发受体-1 (TREM-1)的动态表达,分析TREM-1与巨噬细胞M1极化的相关性.方法 34只C57BL/6小鼠随机分为对照组(10只)和感染组(24只),对照组小鼠不作任何处理,取肝组织;感染组每鼠经腹部皮肤接种日本血吸虫尾蚴(15±2)条,感染后第3、6、9和12周,各取6只小鼠的肝组织.实时荧光定量PCR检测对照组、各时间点感染组小鼠肝组织中TREM-1和白细胞介素-1β (IL-1β) mRNA的相对转录水平;蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测各鼠肝组织中TREM-1和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白相对表达水平;制备各鼠肝组织冰冻切片,免疫荧光染色技术检测肝组织巨噬细胞中TREM-1的表达情况.合成TREM-1 siRNA和阴性siRNA (NC siRNA),分别转染RAW264.7巨噬细胞,培养6h后分为TREM-1 siRNA、NC siRNA、TREM-1 siRNA+日本血吸虫成虫抗原(SWA)和NC siRNA+SWA组,后两组加入终浓度为20 μg/ml的SWA作用48 h,收集细胞,Western blotting检测细胞中TREM-1和iNOS蛋白的相对表达水平.多组之间TREM-1、IL-1β mRNA相对转录水平,TREM-1和iNOS蛋白相对表达水平的比较使用单因素方差分析,两组之间的比较采用独立样本t检验.结果 实时荧光定量PCR检测结果显示,感染后第3、6、9和12周,感染组小鼠肝组织中TREM-1 mRNA相对转录水平分别为14.28±6.26、183.41±37.37、68.17±16.19和106.91±45.70 (F=6,668,P＜0.01),其中感染后第6周感染组与对照组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.881,P＜0.01);IL-1β mRNA的相对转录水平分别为8.16±1.91、56.12±10.68、24.41±3.54和24.28±2,98 (F=16.943,P＜ 0.01),各时间点感染组与对照组(1.00)比较差异均有统计学意义(t=-3.740,P＜ 0.05;t =-5.159、-6.606和-7.799,P＜0.01).Western blotting检测结果显示,感染后第3、6、9和12周,感染组小鼠肝组织中TREM-1蛋白相对表达水平分别为1.24±0.38、1.50±0.13、1.13±0.28和1.17±0.60 (F=1.547,P＞ 0.05),其中感染后第6周感染组与对照组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-6.011,P＜0.01);iNOS蛋白相对表达水平分别为5.27±3.66、23.27±14.72、10.16±4.97和2.69±1.65 (F=9.384,P＜0.01),各时间点感染组与对照组(1.00)比较差异均有统计学意义(t=-2.893、-3.716、-4.537和-2.571,P＜0.05).免疫荧光染色结果显示,对照组小鼠肝组织中TREM-1(绿色)和F4/80(红色)的表达较少,感染组小鼠肝组织肉芽肿周围TREM-1和F4/80的表达增加,TREM-1和F4/80共定位的细胞(黄色)增多.Western blotting检测结果显示,NC siRNA+ SWA、TREM-1 siRNA、TREM-1 siRNA+ SWA组TREM-1蛋白相对表达水平分别为1.35±0.13、0.58±0.09和1.09±0.03 (F=46.689,P＜ 0.01),其中NC siRNA+SWA、TREM-1 siRNA组与NC siRNA组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.716、7.858,P＜ 0.05),TREM-1 siRNA+SWA组与TREM-1 siRNA组比较差异有统计学意义(t=9.000,P＜0.01).NC siRNA+SWA、TREM-1 siRNA、TREM-1 siRNA+SWA组iNOS蛋白相对表达水平分别为3.69±1.04、0.77±0.12和2.74±0.86 (F=12.714,P＜0.01),其中NC siRNA+ SWA、TREM-1 siRNA组与NC siRNA组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.451、3.254,P＜ 0.05),TREM-1 siRNA+SWA组与TREM-1 siRNA组差异无统计学意义(t=3.913,P＞ 0.05).结论 日本血吸虫感染小鼠肝组织中TREM-1表达显著上调,抑制TREM-1的表达能够抑制SWA作用的巨噬细胞iNOS的表达.
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