【摘 要】
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乙酰辅酶A羧化酶催化乙酰辅酶A和HCO32-合成丙二酰辅酶A，是脂肪酸合成的限速步骤。本研究以高产油核桃内生细菌Bacillus subtilis HB1310基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增其乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基（β-CT）基因，构建pET-28a-acb载体并在Escherichia coli BL21中表达，进一步对该酶基因的诱导表达条件进行了优化。SDS-PAGE以及We
【基金项目】
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国家自然基金（21666034）； 安徽工程大学中青年拔尖人才计划（S022019014）；
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乙酰辅酶A羧化酶催化乙酰辅酶A和HCO32-合成丙二酰辅酶A，是脂肪酸合成的限速步骤。本研究以高产油核桃内生细菌Bacillus subtilis HB1310基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增其乙酰辅酶A羧化酶羧基转移酶β亚基（β-CT）基因，构建pET-28a-acb载体并在Escherichia coli BL21中表达，进一步对该酶基因的诱导表达条件进行了优化。SDS-PAGE以及Western-Blot 结果表明乙酰辅酶A羧化酶在大肠杆菌BL21中实现了表达，分子量在25-35 kDa之间，与其理论分子量一致。同时获得重组蛋白最佳诱导表达条件：诱导剂IPTG 浓度为1 mmol/L，诱导时间6 h，诱导初始pH为8.0。在此最优条件下，工程菌的乙酰辅酶A羧化酶活性可达4.11±0.026 U/mL，较野生菌提高39.7%。本研究为高产油核桃内生细菌乙酰辅酶羧化酶的功能研究提供了借鉴。
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