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目的:获得表达量较高且有活性的人源SIRT4蛋白。方法:将SIRT4基因克隆到p PICZA载体上,得到重组p PICZA-SIRT4表达质粒。重组质粒线性化后转入到巴斯德毕赤酵母X33感受态细胞中,筛选出阳性菌株。将阳性重组菌株发酵培养,并对诱导剂甲醇浓度进行优化,表达蛋白用镍柱His TrapTMHP进行纯化,并对表达的蛋白进行活性考察。结果:SDS-PAGE显示表达的SIRT4目的蛋白大小约33 000,与预期蛋白相对分子质量大小相符,进一步利用His标签抗体通过Western blot确认了目标蛋