小鼠PKM1基因慢病毒过表达载体的构建和稳定转染C2C12细胞株的筛选及其对糖酵解的影响

来源 :食品工业科技 | 被引量 : 0次 | 上传用户：qdragon

【摘要】

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本研究旨在构建含小鼠PKM1基因的慢病毒过表达载体,筛选稳定过表达PKM1的C2C12细胞株,初步检测PKM1对细胞糖酵解的影响。提取小鼠背最长肌总RNA并反转录合成cDNA。用"Golden

【作者】

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姜声旺沈清武

【机构】

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湖南农业大学动物科学技术学院,湖南农业大学食品科学技术学院

【出处】

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食品工业科技

【发表日期】

：

2020年10期

【关键词】

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丙酮酸激酶慢病毒过表达载体稳转株糖酵解 pyruvate kinaselentivirusoverexpression vectorstable cel

【基金项目】

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“十三五”国家重点研发计划(2018YFD0500405),国家自然科学基金(31571862)

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本研究旨在构建含小鼠PKM1基因的慢病毒过表达载体,筛选稳定过表达PKM1的C2C12细胞株,初步检测PKM1对细胞糖酵解的影响。提取小鼠背最长肌总RNA并反转录合成cDNA。用"Golden Gate"法构建带FLAG标签的PKM1表达载体并转染293T细胞,进行慢病毒包装并检测慢病毒滴度。转染C2C12细胞并优化转染条件,根据载体携带的抗性基因puro,用嘌呤霉素筛选稳转株。通过qPCR和Western Blot从转录水平和翻译水平检测目的基因的表达。通过测定细胞培养基的pH、乳酸

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