【摘 要】
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目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(Adv-hBMP-2)基因转染人脂肪源性基质细胞(ADSCs)的可行性及其成骨作用.方法从人脂肪组织中提取间充质细胞,分别转染β-半乳糖苷酶(
【机 构】
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上海第二医科大学附属第九人民医院骨科,美国华盛顿大学医学院骨科研究室
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目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(Adv-hBMP-2)基因转染人脂肪源性基质细胞(ADSCs)的可行性及其成骨作用.方法从人脂肪组织中提取间充质细胞,分别转染β-半乳糖苷酶(β-gal)基因和hBMP-2基因,通过X-gal染色明确转染效率,免疫沉淀+Western blot法和ELISA 法检测BMP-2表达,确定BMP-2表达量、表达时间及其相互关系,流式细胞仪观察基因转染对细胞凋亡的影响,并将转基因细胞注入裸鼠股部肌内行X线及组织学检查.结果 X-gal染色显示转染效率达91%.免疫沉淀+Western blot法和ELISA法显示转染hBMP-2的ADSC具有较高且稳定的BMP-2的表达,20 d内表达量无明显减退.流式细胞表明腺病毒转染后细胞凋亡率上升,但上升幅度不大.裸鼠肌内注射转基因细胞后2周即显示有异位骨形成,4周明显增多,对照组无骨组织形成.结论 ADSC是较好的基因治疗载体细胞,转染hBMP-2后可以诱导裸鼠体内骨形成.
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