目的 探讨金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在高糖诱导的肾小球系膜细胞(MC)凋亡中的作用及机制.方法用流式AnnexinV/PI双染法及吖啶橙染色检测大鼠MC经不同浓度葡萄糖作用后的凋亡率.用脂质体法将正义、反义人TIMP(hTIMP)-1转染到MC中.采用PCR及RT-PCR检测hTIMP-1的整合及大鼠内源性TIMP-1(rTIMP-1)、bax和bcl-2表达.用CaspACETM Assay System检测半胱氨酸天胱氨酸蛋白酶(caspase-3)的蛋白活性.结果高糖以剂量及时间依赖的方式诱导凋亡,相关系数r分别为0.925、0.9867,P均＜0.01.在葡萄糖浓度为30 mmol/L培养条件下,hTIMP-1正义转染组的MC 24 h凋亡率为(4.30±1.11)%,48 h为(7.78±0.92)%,与正常对照组[24 h(14.95±1.60)%,48 h(43.03±4.20)%]及空载体组[24 h(16.50±0.83)%,48 h(40.82±2.46)%]相比,细胞凋亡显著减少(P＜0.01);hTIMP-1反义转染组MC 24 h凋亡率为(22.5±1.60)%,48 h为(53.68±3.40)%,与正常对照组和空载体组相比,细胞凋亡显著增加(P＜0.01).高糖作用后,正义TIMP-1下调MC bax mRNA的表达,反义hTIMP-1使之表达上调.与对照组(A值0.1407±0.007)相比,正义hTIMP-1组caspse-3活性(A值0.086±0.009)显著降低,(P＜0.01),反义hTIMP-1组caspase-3活性(A值0.186±0.02)显著增高,(P＜0.01).TIMP-1转染不影响bcl-2 mRNA水平的表达.结论TIMP-1能够抑制高糖诱导的MC凋亡,这种作用部分是通过bax及caspase-3途径来实现的。
金属蛋白酶组织抑制剂1抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡
【摘 要】
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目的 探讨金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)在高糖诱导的肾小球系膜细胞(MC)凋亡中的作用及机制.方法用流式AnnexinV/PI双染法及吖啶橙染色检测大鼠MC经不同浓度葡萄糖作用后的凋亡率.用脂质体法将正义、反义人TIMP(hTIMP)-1转染到MC中.采用PCR及RT-PCR检测hTIMP-1的整合及大鼠内源性TIMP-1(rTIMP-1)、bax和bcl-2表达.用CaspACETM A
【机 构】
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116011,大连医科大学附属第一医院肾内科,116011,大连医科大学附属第一医院肾内科,116011,大连医科大学附属第一医院肾内科,116011,大连医科大学附属第一医院肾内科,116011,大
【出 处】
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中华肾脏病杂志
【发表日期】
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2005年21期
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