靶向大鼠沉默信息调节因子1基因小干扰RNA慢病毒载体对大鼠视网膜神经节细胞中沉默信息调节因子1表达的影响

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目的

观察蓝光诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞外泌体对核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白(NLRP3)炎性体相关因子表达的影响。

方法

人RPE细胞株贴壁细胞分为实验组和对照组。实验组细胞以蓝光照射6h建立光损伤模型;对照组细胞常规培养。分级低温超速离心法获得两组细胞外泌体,透射电子显微镜观察其形态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测两组细胞外泌体表面CD63及白细胞介素(IL)-1β、IL-18、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-1)蛋白相对表达水平。将两组细胞外泌体作用于正常RPE细胞,据此分为蓝光诱导细胞外泌体+实验组、正常细胞外泌体+对照组。培养24 h后,Western blot检测两组细胞外泌体中IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白表达;荧光实时定量聚合酶链反应检测两组细胞中NLRP3 mRNA表达。

结果

实验组细胞发生损伤失去原有形态;外泌体均呈双凹托盘状,直径50~200 nm;实验组细胞外泌体中IL-1β (t=18.04)、IL-18 (t=12.55)、caspase-1 (t=14.70)蛋白表达量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。蓝光诱导细胞外泌体+实验组细胞外泌体中IL-1β (t=18.59)、IL-18 (t=23.95)、caspase-1(t=35.27)蛋白表达量明显高于正常细胞外泌体+对照组,差异均有统计学意义(P<0.001 );蓝光诱导细胞外泌体+实验组、正常细胞外泌体+对照组细胞内NLRP3 mRNA相对表达量分别为1.000±0.069、0.200±0.010,两者比较,差异有统计学意义(t=12.20,P<0.001 )。

结论

蓝光诱导RPE细胞外泌体可使RPE细胞内NLRP3炎性体相关细胞因子IL-1β、IL-18、caspase-1蛋白和NLRP3 mRNA表达上调。

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