【摘 要】
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必需脂肪酸为人体健康和生命所必需,但机体自身不能合成,研究表明ω-3族脂肪酸对人体的生理功能有更加积极的影响.哺乳动物体内缺乏ω-3去饱和酶的基因,来自线虫Caenorhabditis elegans的△15-脂肪酸去饱和酶(△15 Des)可以将体内ω-6多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)转化为ω-3 PUFAs.利用PiggyBac转座子(PB)系统构建表达A15 Des酶活性的转基因小鼠可以在较短时间内繁育出稳定遗传的纯合子转基因小鼠,整合率高达35
【机 构】
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贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室,贵州贵阳550025;贵州医科大学生物与工程学院医药生物技术工程研究中心,贵州贵阳550025;贵州医科大学生物与工程学院生物与医学工程重点实验室,
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必需脂肪酸为人体健康和生命所必需,但机体自身不能合成,研究表明ω-3族脂肪酸对人体的生理功能有更加积极的影响.哺乳动物体内缺乏ω-3去饱和酶的基因,来自线虫Caenorhabditis elegans的△15-脂肪酸去饱和酶(△15 Des)可以将体内ω-6多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFAs)转化为ω-3 PUFAs.利用PiggyBac转座子(PB)系统构建表达A15 Des酶活性的转基因小鼠可以在较短时间内繁育出稳定遗传的纯合子转基因小鼠,整合率高达35.1％.饲料中添加6％ ω-6 PUFAs饲喂小鼠,通过气相色谱(gas chromatography,GC)检测小鼠体内脂肪酸的变化,荧光定量PCR (quantitative PCR,qPCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)来检测△15 Des在小鼠体内的表达水平.从qPCR和GC结果分析,阳性小鼠的基因活性率为61.53％,与传统方法相比,△15 Des的转入效率及活性都显著提高,且纯合子比杂合子表达更高的活性,进一步验证了PiggyBac转座子系统高效的转导效率和安全稳定性.
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