【摘 要】
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目的 比较细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)转基因小鼠研制中的几个关键因素如实验小鼠遗传背景、BAC质粒注射浓度、BAC质粒片段大小和BAC注射液存放时间等,优化BAC转基因小鼠研制技术.方法 采用相同的BAC DNA制备方法,分别选取C57BL/6J(B6)和FVB/N两种实验小鼠,用质量浓度分别为0.75、1.0、1.5和2.0 ng/μL的BAC注射液进行胚胎显微注射,分析不同BAC DNA片段大小和BAC载体DNA制备后至注射前的时间长度,比较
【机 构】
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浙江大学实验动物中心,杭州 310058;浙江大学医学院,杭州 310058
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目的 比较细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)转基因小鼠研制中的几个关键因素如实验小鼠遗传背景、BAC质粒注射浓度、BAC质粒片段大小和BAC注射液存放时间等,优化BAC转基因小鼠研制技术.方法 采用相同的BAC DNA制备方法,分别选取C57BL/6J(B6)和FVB/N两种实验小鼠,用质量浓度分别为0.75、1.0、1.5和2.0 ng/μL的BAC注射液进行胚胎显微注射,分析不同BAC DNA片段大小和BAC载体DNA制备后至注射前的时间长度,比较小鼠出生率、转基因小鼠阳性率.结果 用FVB/N为背景的转基因小鼠阳性率较用C57BL/6J高(P1.5 ng/μL组>1.0 ng/μL组>2.0 ng/μL组.4个BAC质粒质量浓度注射时,C57BL/6J转基因小鼠阳性率由高到低排序依次为1.5 ng/μL>1.0 ng/μL>2.0 ng/μL=0.75 ng/μL,FVB/N转基因小鼠阳性率由高到低排序依次为1.5 ng/μL>1.0 ng/μL>2.0 ng/μL>0.75 ng/μL.当BAC片段大小为197 kb时,仔鼠出生率最高,为(22.49±9.41)％;片段大小为99 kb时仔鼠出生率最低,为(13.61±15.65)％;当BAC片段为197 kb时,转基因小鼠阳性率最高,为(13.56±12.88)％,极显著高于114 kb(P<0.01),显著高于99 kb(P<0.05).BAC注射液的存放时间与转基因小鼠阳性率并不呈线性关系.结论 相较于C57BL/6J,FVB/N背景更适于BAC转基因小鼠的研制.BAC注射液质量浓度为1.5 ng/μL时,阳性转基因小鼠的制备效率最高.BAC片段大小并非阳性转基因小鼠的限制因素.BAC载体DNA制备后1周内完成注射的效果最佳.
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