【摘 要】
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目的：探究p53介导的铁死亡在调控人结直肠癌顺铂耐药中的作用及机制。方法：采用人结肠腺癌细胞株LOVO反复短期暴露于顺铂并逐渐增加顺铂浓度的方法建立耐顺铂细胞株LOVO/DDP。顺铂单独及联合铁死亡激活剂erastin/铁死亡抑制剂liproxstatin-1处理LOVO和LOVO/DDP细胞。CCK-8法测定不同处理组的细胞活力，计算顺铂的IC50值；RT-qPCR检测铁死亡相关基因的mRNA表
【机 构】
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锦州医科大学湖北医药学院附属襄阳市第一人民医院研究生联合培养基地肿瘤科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（No.81703015）； 湖北省自然科学基金资助项目（No.2021CFB582）； 襄阳市科学技术局项目（No.2021YL23）； 湖北省卫生健康委面上项目（No.WJ2021M069）； 湖北省教育厅科研计划重点项
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目的：探究p53介导的铁死亡在调控人结直肠癌顺铂耐药中的作用及机制。方法：采用人结肠腺癌细胞株LOVO反复短期暴露于顺铂并逐渐增加顺铂浓度的方法建立耐顺铂细胞株LOVO/DDP。顺铂单独及联合铁死亡激活剂erastin/铁死亡抑制剂liproxstatin-1处理LOVO和LOVO/DDP细胞。CCK-8法测定不同处理组的细胞活力，计算顺铂的IC50值；RT-qPCR检测铁死亡相关基因的mRNA表达水平；采用活性氧（reactive oxygen species,ROS）绿色荧光探针2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯（2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCFH-DA）、线粒体红色荧光探针MitoTracker Red CMXRos及线粒体JC-1检测试剂盒测定不同处理组中细胞内ROS和线粒体功能；采用亚铁离子荧光探针FerrOrange检测细胞内亚铁离子含量；Western blot检测不同处理组中溶质载体家族7成员11（solute carrier family 7 member 11, SLC7A11）重组蛋白、谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4, GPX4）和p53的蛋白表达水平。结果：顺铂单独处理后，LOVO/DDP细胞活力较LOVO细胞下降平缓，ROS增加和线粒体损伤不显著，促进铁死亡的基因低表达，抑制铁死亡的基因高表达，SLC7A11和GPX4的蛋白表达略下降，p53表达显著升高（P＜0.05）；联合铁死亡激活剂剂erastin组LOVO/DDP细胞活力较LOVO细胞显著下降，ROS和亚铁离子水平显著增加，诱导线粒体功能障碍，SLC7A11和GPX4的表达显著下降，p53的表达显著增加（P＜0.05）；联合铁死亡抑制剂liproxstatin-1可逆转上述结果。结论：p53介导的铁死亡可增强结直肠癌细胞对顺铂的敏感性。
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