【摘 要】
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目的构建在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶的转基因小鼠.方法利用聚合酶链反应(PCR)获得小鼠肝细胞特异性启动子--白蛋白启动子,指导Cre重组酶在肝细胞中特异表达.通过受精卵
【基金项目】
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国家自然科学基金;国家高技术研究发展计划(863计划);国家科技攻关项目;国家自然科学基金
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目的构建在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶的转基因小鼠.方法利用聚合酶链反应(PCR)获得小鼠肝细胞特异性启动子--白蛋白启动子,指导Cre重组酶在肝细胞中特异表达.通过受精卵显微注射的方法,将转基因载体导入小鼠受精卵中,获得转基因小鼠.利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转基因小鼠中Cre重组酶转录的组织特异性,并将转基因小鼠与Smad4条件基因打靶小鼠进行杂交,利用PCR和Southern Blot进一步检测Cre重组酶在小鼠体内表达的组织特异性及其介导lox P位点之间发生重组的活性.结果获得了白蛋白启动子,构建了转基因载体pAlb-Cre.将转基因载体进行显微注射,共注射了837枚小鼠受精卵.PCR检测显示5 3只子代小鼠中有7只整合了Cre重组酶基因,Southern杂交结果证实共获得6只基因组上整合C re重组酶基因的首建者小鼠.RT-PCR结果表明其中3只阳性小鼠的子代鼠在肝脏和睾丸中正确转录了外源基因.将在肝脏和睾丸中正确转录了外源基因的两只阳性鼠与Smad4条件基因打靶的小鼠杂交,通过PCR检测发现Cre转基因与Smad4条件基因打靶双阳性的子代鼠在肝脏中特异表达Cre重组酶,并能介导基因组中loxP序列间的基因重组,此结果通过Southern杂交得到了进一步证实.结论成功构建了在小鼠肝细胞中特异表达Cre重组酶的转基因小鼠,为利用条件基因打靶技术研究基因在肝脏发育及相关疾病中的功能及机制奠定了基础.
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