【摘 要】
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目的 获得粉尘螨变应原第3组分Der f 3原核表达产物并检测其与尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体IgE反应性. 方法 酶切质粒pET28a(+)-Der f 3获得目的基因Der f 3,将其与pET32a载体
【机 构】
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上海浦南医院检验科,上海200125;江苏盐城卫生职业技术学院,江苏盐城224006
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目的 获得粉尘螨变应原第3组分Der f 3原核表达产物并检测其与尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体IgE反应性. 方法 酶切质粒pET28a(+)-Der f 3获得目的基因Der f 3,将其与pET32a载体连接成质粒pET32 a (+)-Der f3,转化BL21细菌,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni+离子亲和层析柱纯化表达产物,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blot和质谱鉴定纯化产物.以纯化产物为包被抗原,采用间接ELISA检测尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体反应情况. 结果 成功构建了原核表达质粒pET32 a(+)-Der f 3.将该质粒转化E.coli BL21诱导表达,亲和层析纯化后经SDS-PAGE鉴定获得目的蛋白,Western blot验证该蛋白的能够与载体的组氨酸标签结合,质谱鉴定其结构与天然Der f 3一致.以此产物为包被抗原采用间接ELISA检测尘螨过敏性哮喘患儿血清,阳性率为29.73％ (11/37). 结论 成功构建了原核表达质粒pET32 a (+)-Der f 3,亲和纯化获得的目的蛋白具有良好的反应原性.
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