观察调控微小RNA-155（miR-155）对脂多糖（LPS）诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响。
方法体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383，取处于对数生长期的细胞进行实验。①以1 mg/L的LPS分别刺激大鼠肺泡巨噬细胞3、6、12、24 h，并设磷酸盐缓冲液（PBS）对照组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的动态变化，采用实时定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞中miR-155的动态表达，确定LPS刺激的最佳时间为12 h。②应用羧基荧光素（FAM）荧光标记的模拟物（FAM mimic）和抑制物（FAM inhibitor）分别转染肺泡巨噬细胞6 h，倒置荧光显微镜下观察转染效果，确定mimic的最佳转染浓度为20 nmol/L，inhibitor的最佳转染浓度为100 nmol/L。按最佳转染浓度将miR-155 mimic、miR-155 inhibitor分别转染至肺泡巨噬细胞24 h后，给予1 mg/L的LPS刺激细胞12 h，并设mimic阴性对照+LPS组和inhibitor阴性对照+LPS组。采用ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、TNF-α的表达，观察miR-155对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用。
结果①用1 mg/L的LPS刺激肺泡巨噬细胞后，细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量和细胞中miR-155的表达均随时间延长而呈持续升高趋势，IL-1β和TNF-α含量于12 h达峰值，miR-155表达于24 h达峰值〔与PBS对照组比较，IL-1β（ng/L）：910.43±36.09比22.66±7.84，TNF-α（ng/L）：3 138.39±394.10比233.92±8.84，miR-155（2-ΔΔCt）：7.82±0.30比1，均P<0.05〕。②倒置荧光显微镜下显示，采用20 nmol/L FAM mimic或100 nmol/L FAM inhibitor转染肺泡巨噬细胞6 h后，大量细胞呈现绿色荧光，提示转染成功。采用20 nmol/L的miR-155 mimic转染细胞24 h后细胞中miR-155表达较其阴性对照组上调了（236.73±46.49）倍（P<0.05），加入1 mg/L的LPS刺激细胞24 h后上清液中IL-1β、TNF-α含量较其阴性对照组显著降低〔IL-1β（ng/L）：324.37±36.59比799.31±39.44，TNF-α（ng/L）：1 554.01±342.48比3 020.49±418.30，均P<0.05〕；而用100 nmol/L的miR-155 inhibitor转染细胞24 h后细胞中miR-155活性被明显抑制，其表达较其阴性对照组下降了（4.00±3.26）%，但差异无统计学意义（P>0.05），加入1 mg/L的LPS刺激细胞12 h后细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量均较其阴性对照组显著升高〔IL-1β（ng/L）：1 358.98±212.04比878.68±53.42，TNF-α（ng/L）：4 225.57±281.11比2 881.32±286.08，均P<0.05〕。
结论在LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应中，miR-155能够起到明显的抑制作用。