农杆菌介导紫花苜蓿子叶遗传转化的影响因素研究

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以5-7d的紫花苜蓿无菌苗为材料进行卡那霉素抗性筛选,用RG-2质粒(合VP7基因和卡那霉素抗性基因)和农杆菌(EHA101、EHA105)构建重组质粒,对无菌苗和重组质粒进行共培养,研究菌株类型、菌液浓度对转化效率的影响。结果表明,菌株EHA105对紫花苜蓿的转化率达4%,重悬菌液的0D60。以0.3~0.5为宜,农杆菌侵染时间以10~12min较好;PCR检测结果表明,37株卡那霉素抗性植株中30株为阳性,说明VP7外源基因已整合到受体植物基因组中。
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