【摘 要】
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目的·探究钩端螺旋体56606v对小鼠中性粒细胞凋亡的影响及相关作用机制。方法·用钩端螺旋体56606v在感染复数（multiplicity of infection,MOI）分别为100、300、500时感染小鼠中性粒细胞0.5、6、12、24 h；以未被感染的中性粒细胞为对照。将含有4μmol/L星形孢菌素（Staurosporine,STS）的等量细胞培养基处理的细胞作为凋亡阳性对照。采用流
【机 构】
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上海交通大学医学院免疫学与微生物学系
【基金项目】
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国家自然科学基金（8197080238）～～；
论文部分内容阅读
目的·探究钩端螺旋体56606v对小鼠中性粒细胞凋亡的影响及相关作用机制。方法·用钩端螺旋体56606v在感染复数（multiplicity of infection,MOI）分别为100、300、500时感染小鼠中性粒细胞0.5、6、12、24 h；以未被感染的中性粒细胞为对照。将含有4μmol/L星形孢菌素（Staurosporine,STS）的等量细胞培养基处理的细胞作为凋亡阳性对照。采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况；采用Western blotting技术检测钩端螺旋体56606v感染小鼠中性粒细胞后caspase-3的切割情况和核因子κB （NF-κB）通路的激活情况，并验证NF-κB抑制剂BAY 11-7082对NF-κB通路的抑制作用；通过添加NF-κB抑制剂BAY 11-7082，进一步检测NF-κB通路在钩端螺旋体56606v导致的中性粒细胞凋亡抑制中是否发挥作用；将巨噬细胞与钩端螺旋体56606v感染或未感染的中性粒细胞共孵育，通过流式细胞术检测巨噬细胞对中性粒细胞的吞噬情况。结果·流式细胞术检测结果显示，钩端螺旋体感染组与未感染对照组相比，小鼠中性粒细胞凋亡率降低；随MOI的增大，钩端螺旋体对中性粒细胞的凋亡抑制作用增强；不同MOI条件下，2组凋亡率的差异均有统计学意义（均P=0.000）。MOI=100的钩端螺旋体感染中性粒细胞0.5、6和12 h时，其凋亡率均较相应的未感染对照组降低（均P＜0.05）；而使用促凋亡剂STS处理后，则增强了小鼠中性粒细胞的凋亡程度。Western blotting结果显示caspase-3的切割在钩端螺旋体56606v感染后明显减少，NF-κB磷酸化水平在感染后显著上升，添加NF-κB抑制剂BAY 11-7082能够显著抑制感染后和未感染条件下NF-κB通路的激活。在钩端螺旋体56606v感染或未感染条件下，添加NF-κB抑制剂BAY11-7082均显著提高了小鼠中性粒细胞凋亡率（均P=0.000）。钩端螺旋体56606v感染的中性粒细胞与未感染对照组相比，被巨噬细胞吞噬的比例显著降低（P=0.027）。结论·钩端螺旋体56606v通过激活NF-κB通路，抑制小鼠中性粒细胞的凋亡，进一步降低巨噬细胞对中性粒细胞的胞葬作用。
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