【摘 要】
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目的 研究抑制芳香化酶表达对稳定转染人SOD1-G93A(hSOD1-G93A)的NSC-34细胞活力的影响并探讨可能的机制.方法 将稳定转染hSOD1-G93A的NSC-34细胞分为三组,分别为对照组(SOD-G93A)、转染空质粒组(SOD1-G93A-E)、转染芳香化酶抑制质粒Cyp19a1 ShRNA组(SOD1-G93A-D).通过实时定量PCR检测Cyp19a1 mRNA表达水平,通过CCK8试剂盒检测各组细胞活力,通过LDH试剂盒检测各组细胞LDH释放水平,通过蛋白印迹法检测各组细胞中芳香化
【机 构】
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050000石家庄,河北医科大学第二医院神经内科
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目的 研究抑制芳香化酶表达对稳定转染人SOD1-G93A(hSOD1-G93A)的NSC-34细胞活力的影响并探讨可能的机制.方法 将稳定转染hSOD1-G93A的NSC-34细胞分为三组,分别为对照组(SOD-G93A)、转染空质粒组(SOD1-G93A-E)、转染芳香化酶抑制质粒Cyp19a1 ShRNA组(SOD1-G93A-D).通过实时定量PCR检测Cyp19a1 mRNA表达水平,通过CCK8试剂盒检测各组细胞活力,通过LDH试剂盒检测各组细胞LDH释放水平,通过蛋白印迹法检测各组细胞中芳香化酶(aromatase)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase1,NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)表达水平.结果 瞬时转染48h后,SOD1-G93A-D组Cyp19a1 mRNA表达水平较SOD1-G93A-E组显著下降(P＜0.05),细胞活力较SOD1-G93A-E组及SOD1-G93A组明显下降(P＜0.05),LDH释放水平较其他两组明显升高(P＜0.05).细胞活力及LDH释放水平在SOD1-G93A-E组及SOD1-G93A组间未发现显著差异(P＞0.05).芳香化酶、NQO1和GCLM蛋白水平在SOD1-G93A-D组明显降低(P＜0.05).结论 抑制芳香化酶通过降低抗氧化应激能力影响稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞活力.
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