【摘 要】
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目的 探索流式细胞术基于外周血样本预处理抗体量、样本放置时间、样本固定与否的最佳试验条件。方法 采集3只正常大鼠EDTA抗凝全血进行白细胞及淋巴细胞计数,随机定义为样本A,B,C,各样本分为4份,分别用于检测各淋巴细胞亚群CD3+,CD3-CD45RA+,CD3+CD4+,CD3+CD8+的含量,每份样本抗体上样量都以标示量1μg的1/4,1/2,1,2倍孵育并标记。根据试验结果,1/4倍抗体完全
【基金项目】
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中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目（2019-12M-5-020）；
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目的 探索流式细胞术基于外周血样本预处理抗体量、样本放置时间、样本固定与否的最佳试验条件。方法 采集3只正常大鼠EDTA抗凝全血进行白细胞及淋巴细胞计数,随机定义为样本A,B,C,各样本分为4份,分别用于检测各淋巴细胞亚群CD3+,CD3-CD45RA+,CD3+CD4+,CD3+CD8+的含量,每份样本抗体上样量都以标示量1μg的1/4,1/2,1,2倍孵育并标记。根据试验结果,1/4倍抗体完全满足检测所需,又采集3只正常大鼠血液样本,随机定义为样本D,E,F,处理同样本A,B,C,每份样本抗体上样量都以标示量1μg的1/4,1/8倍孵育并标记。将1/4抗体标示量处理好的样本D,E,F,即刻上机检测（固定前）,之后将样本分成两部分:一部分分别于固定后15 min,24 h上机检测;另一部分2～8℃避光保存,分别保存0.5,1.5,3 h后上机检测。结果（1）各样本淋巴细胞数处于47万～100万。样本A,B,C抗体使用量降至0.25μg时,各样本淋巴细胞亚群比例没有显著性下降。样本D,F抗体使用量在标示量的1/8时,CD3+,CD3-CD45RA+,CD3+CD8+细胞的比例显著降低（P＜0.05）,样本E淋巴细胞亚群数量未发生显著性变化。（2）与固定前比较,固定15 min后样本D,E,F的CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+细胞比例在各血样样本中均有不同程度的下降（P＜0.05）。（3）非固定样本D,E,F中CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,CD3-CD45RA+测定值的总体变化趋势为随保存时间延长逐渐下降,而其中样本D中CD3-CD45RA+测定值在保存3 h时未发生显著性变化。（4）与固定保存15 min比较,固定保存24 h后样本D、E中CD3+,CD3+CD4+细胞比例显著下降（P＜0.05）,样本F淋巴细胞亚群数量未发生显著性变化。结论 淋巴细胞数处于47万～100万时,0.25μg检测抗体完全满足检测所需。样本固定、固定后放置过长时间、样本不固定放置1.5 h以上都会对淋巴细胞亚群数量产生一定影响。
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