【摘 要】
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根据腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因(Pili基因)序列,在Pili基因619 bp Ehe I酶切位点上插入绵羊白细胞介素-2基因(OviIL-2基因),构建了Pili基因与OvIL-2基因的融合基因表达载
【机 构】
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中国农业科学院吉林特产研究所,澳大利亚悉尼大学,解放军军需大学军事兽医研究所
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根据腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因(Pili基因)序列,在Pili基因619 bp Ehe I酶切位点上插入绵羊白细胞介素-2基因(OviIL-2基因),构建了Pili基因与OvIL-2基因的融合基因表达载体.先用EcoR V、BamH I双酶切pBlue-script-OvIL-2重组质粒,获得两端具有EcoR V、BamH I位点的OviIL-2基因片段.用Klenow补平后,与经Ehe I酶切后的重组质粒PME290-Pili进行平端连接;转化JM105感受态细胞,筛选阳性克隆,分别用BamH I、EcoR I、XbaI、BglⅡ、PvuⅡ等进行酶切鉴定.然后将阳性重组质粒转染BL-21表达宿主感受态细胞,用0.1 mol/LMgCl2沉淀法和超声波裂解法提取BL-21表达Pili基因与OviIL-2基因融合基因表达蛋白.对流免疫电泳对重组融合蛋白的特异性分析证明,融合蛋白主要在宿主菌体中表达;SDS-PAGE电泳结果表明,重组融合蛋白分子大小约为33 000,表达产物的量约占菌体的5.49%.
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