【目的】探究预处理方式对海带生物质利用率及产氢量的影响，为实现大型海藻资源化利用提供实验依据。【方法】通过苯酚硫酸法、3,5-二硝基水杨酸法和高效液相色谱法，测定不同预处理的海带水解液中生物质利用率（多糖含量、还原糖含量和单糖的组分及含量）。采集渤海天津海域潮间带污泥作为菌源，不同预处理的海带水解液为混合菌群富集培养基，测定混合菌群的生长和产氢量。【结果】硫酸预处理显著提高了海带生物质利用率（P ＜0.001），其中多糖质量浓度为（0.71±0.02）mg/L，还原糖质量浓度为（0.34±0.02）mg/mL，主要单糖质量分数为54.01%。混合菌群基于盐酸预处理的海带水解液累积产氢量最高，为（825.68±14.5）mL/g，相比对照组提高3.7倍。干热、湿热和硫酸预处理下，混合菌群利用海带水解液产氢量分别为（222.22±19.8）mL/g、（237.04±23.8）mL/g和（340.74±22.1）mL/g。【结论】以海带水解液为唯一底物时，硫酸预处理方式对提高海带生物质利用率具有显著促进效应；盐酸预处理方式下，富集混合菌群利用海带水解液产氢效率最高，可应用于海带生物质能源化利用。