稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系的构建

来源 :中国动物传染病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yinmeng6112501
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为了构建稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白的Marc-145细胞系,以PRRSV全长感染性克隆为模板,通过PCR方法扩增PRRSV N基因,将N基因克隆到慢病毒载体中,获得重组质粒pLenti-CMV-N,利用三质粒慢病毒包装系统转染293T细胞,包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒,将慢病毒颗粒转导至Marc-145细胞,用潮霉素B初步筛选阳性细胞,采用终点稀释的方法筛选出稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系.通过的PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列,IFA和Western blot试验验证了N蛋白在细胞系中稳定表达.为此,我们成功获得了稳定表达PRRSV N蛋白的Marc-145细胞系.
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