限制性内切酶介导的重叠延伸在人环氧合酶-1（COX-1）基因克隆中的应用

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：garry0809

【摘要】

：

建立一种用于克隆全长基因的、限制性内切酶介导的重叠延伸法．对全长基因进行分段扩增，并利用适当的限制性内切酶对基因序列内相应的限制性位点进行酶切，从而使分段扩增片段得以

【作者】

：

陈晓红王伟程桂芳

【机构】

：

中国协和医科大学中国医学科学院药物研究所北京100050

【出处】

：

中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

：

2004年4期

【关键词】

：

限制性内切酶重叠延伸外显子环氧合酶-1(COX-1) restriction endonuclease overlap extension exon

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助项目 (No .3 9870 90 7)~~

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建立一种用于克隆全长基因的、限制性内切酶介导的重叠延伸法．对全长基因进行分段扩增，并利用适当的限制性内切酶对基因序列内相应的限制性位点进行酶切，从而使分段扩增片段得以重叠并互为模板，在DNA聚合酶的作用下延伸获得全长基因．将环氧合酶-1(COX-1)基因的外显子9巧妙地拼接到了缺失外显子9的COX-1cDNA片段中，获得了COX-1基因的全长cDNA．该方法分3步进行．首先，通过RT-PCR分别扩增跨外显子9的cDNA片段和缺失外显子9的cDNA片段，并克隆到pMD18-T载体上；其次，PCR扩增外显子9

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