缺糖缺氧/再灌注对星形胶质细胞外泌体miRNAs表达的影响

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目的 探讨缺糖缺氧/再灌注(OGD/R)对星形胶质细胞外泌体中miRNAs表达的影响。方法 采用SD新生鼠大脑皮层原代星形胶质细胞,进行OGD/R处理,采用超高速离心法分别收集上清和细胞内的外泌体。通过透射电镜和流式细胞术鉴定外泌体。采用Illumina Hiseq2500测序平台检测外泌体miRNAs的表达谱,并采用实时荧光定量PCR鉴定miRNAs的表达。使用metascape和miRWalk预测从对照组、缺糖缺氧(OGD) 4 h组和OGD 4 h/R 24 h组3个组中分别挑选出高表达的miRNAs的靶基因,再将挑选出的共同靶基因在Webgestalt中进行KEGG富集分析。采用Western blot(WB)检测OGD/R及其星形胶质细胞外泌体对全反式维甲酸诱导分化的SH-SY5Y 细胞ERK磷酸化水平的影响。结果 与对照组相比,OGD 4h处理改变了星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达谱;而再灌注24 h后改变的miRNAs大部分恢复到对照水平。miRNAs富集分布于外泌体中,而这种富集作用可能不受OGD刺激的影响。对照组、OGD 4h和OGD 4h/R 24h三组中高表达miRNAs的靶基因KEGG通路富集于代谢通路、PI3K-AKT、MAPK和mTOR信号通路等。使用来自于正常星形胶质细胞,或是OGD和OGD/R处理的星形胶质细胞外泌体均能显著上调相应条件下培养的5Y-SY5Y细胞p-ERK1+p-ERK2水平。结论 OGD处理显著影响星形胶质细胞外泌体miRNAs的表达。正常对照组、OGD和OGD/R处理组外泌体中高浓度分布的miRNAs均靶向代谢相关通路、PI3K-AKT、MAPK和mTOR等信号通路。
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