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摘 要：本文采用高效液相法对头孢拉定原料中的2-萘酚的含量进行测定并对2-萘酚的控制方法进行研究。采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-水（45：5：50）为流动相，检测波长为225nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。2-萘酚在0.005～1.28μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。2-萘酚平均回收率分别为99.5%。结论：本法简便、准确，可用于头孢拉定原料中残留2-萘酚的研究。
关键词：头孢拉定；2-萘酚；控制
头孢拉定（Cephradine， Velosef）别名：先锋霉素Ⅵ、头孢菌素Ⅵ等，为第一代半合成头孢菌素。头孢拉定对耐药性金葡菌及其它多种对广谱抗生素耐药的杆菌等有迅速而可靠的杀菌作用，主要用于呼吸道、泌尿道、皮肤和软组织等的感染。部分生产企业用2-萘酚作为沉淀剂，将反应体系中的头孢拉定完全得到分离。2-萘酚中文别名2-羟基萘、乙萘酚、β-萘酚、beta-萘酚、β-羟基萘、B萘酚。2-萘酚不溶于冷水，易溶于热水、乙醚、氯仿、乙醇、苯、甘油及碱液。2-萘酚毒理和苯酚相似而且是更强的腐蚀剂。2-萘酚对血液循環和肾脏有毒害作用[1]。本文采用高效液相法对头孢拉定原料中的2-萘酚的含量进行测定并对2-萘酚的控制方法进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器：ZXTA-20双极反渗透实验室超纯水机（北京卓信博澳仪器有限公司）；SCQ-K001空气超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；UV765紫外可见分光光度计（上海分析仪器厂）；FA124电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；L-3000四元低压自动进样高效液相色谱系统（上海添时科学仪器有限公司）；LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；STI-501Plus等度高效液相色谱仪（赛智科技（杭州）有限公司）；SPCC-220E-国产全自动实验室洗瓶机（东莞市谱标实验器材科技有限公司）；PHS-3C型PH计（上海雷磁仪器厂）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：2-萘酚
1.4 试剂：甲醇（山东省禹城市中美色谱产品厂）、乙腈（山东省禹城市中美色谱产品厂）、三乙胺（南京科捷分析仪器有限公司）、磷酸（南京科捷分析仪器有限公司）、磷酸二氢钾（北京京科瑞达科技公司）、冰醋酸（山东省禹城市中美色谱产品厂）。
1.5 试药：头孢拉定原料
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[2-3]。流动相：乙腈-甲醇-水（45：5：50）为流动相，检测波长：225nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按2-萘酚峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取2-萘酚对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.05μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取供试品，精密称取，置容量中，精密加入流动相10mL，充分振摇后离心取上清液，即得。
2.4 检测限以及定量限
取2-萘酚对照品，用流动相依次稀释。以S/N=3计，检测限为 0.0002%；以S/N=10计，定量限为0.0006%。
2.5 精密度试验
精密称取2-萘酚对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.05μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.93%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量2-萘酚对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.005、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，2-萘酚在0.005～1.28μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的头孢拉定原料样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.96%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
采用加样回收法，将已知含量的头孢氨苄供试品溶液，分别加入一定量的2-萘酚，按“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.5%，RSD为0.86%。
2.9 样品稳定性试验
取同一批头孢拉定原料样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定头孢拉定原料中2-萘酚的RSD=0.89%。结果表明供试品4小时内稳定。
2.10 耐用性
在不同天用L-3000四元低压自动进样高效液相色谱系统及LC-5520高效液相色谱仪，分别进行实验，2-萘酚和主成分头孢氨苄峰分离良好，显示方法具有比较充分的色谱耐用性。
2.11 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定头孢拉定原料10批样品中2-萘酚的含量，结果10批样品的含量分别0.00078%、0%、0%、0.00681%、0.00081%、0%、0%、0%、0.00731%、0%。
3 讨论
分别考察甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2），乙腈-甲醇-0.05%磷酸（15：15：70），乙腈-甲醇-水（45：5：50），乙腈-甲醇-水（50：5：45），乙腈-甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氢钾-冰醋酸（20∶5：75：0.1），甲醇-0.025moLKH2PO4（15∶85）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水（45：5：50）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（45：5：50）为流动相为流动相。2-萘酚有未检出和检出，检出含量差异较大说明孢拉定原料在生产过程中2-萘酚回收工艺稳定性较差。有部分生产企业用2-萘酚作为沉淀剂，将反应体系中的头孢拉定完全得到分离，但2-萘酚回收工艺稳定性较差。如不能很好的回收2-萘酚应考虑其他分离方法。
参考文献
[1]Aqueous oxytetracycline degradation and the toxicity change of degradation compounds in photoirradiation process[J]. JIAO Shaojun～1 ZHENG Shourong～1 YIN Daqiang～（2，*）WANG Lianhong～1 CHEN Liangyan～1 1.State Key Laboratoo，of Pollution Control and Resource Reuse，School of the Environment，Nanjing University，Nanjing 210093，China. 2.Key Laboratory of Yangtze Water Environment of Ministry of the State Education，Tongji University，Shanghai 200092，China. Journal of Environmental Sciences. 2008（07）.
[2]万有岳，李琼莉.高效液相色谱法测定硫酸锌电解液中的α-亚硝基-β-萘酚、β-萘酚[J].中国有色冶金，2012（03）.
[3]周建科，韩朝家，唐翠苓，王琳.固相分散萃取-液相色谱法测定番茄酱中2-萘酚[J].食品工程，2011（01）.
关键词：头孢拉定；2-萘酚；控制
头孢拉定（Cephradine， Velosef）别名：先锋霉素Ⅵ、头孢菌素Ⅵ等，为第一代半合成头孢菌素。头孢拉定对耐药性金葡菌及其它多种对广谱抗生素耐药的杆菌等有迅速而可靠的杀菌作用，主要用于呼吸道、泌尿道、皮肤和软组织等的感染。部分生产企业用2-萘酚作为沉淀剂，将反应体系中的头孢拉定完全得到分离。2-萘酚中文别名2-羟基萘、乙萘酚、β-萘酚、beta-萘酚、β-羟基萘、B萘酚。2-萘酚不溶于冷水，易溶于热水、乙醚、氯仿、乙醇、苯、甘油及碱液。2-萘酚毒理和苯酚相似而且是更强的腐蚀剂。2-萘酚对血液循環和肾脏有毒害作用[1]。本文采用高效液相法对头孢拉定原料中的2-萘酚的含量进行测定并对2-萘酚的控制方法进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器：ZXTA-20双极反渗透实验室超纯水机（北京卓信博澳仪器有限公司）；SCQ-K001空气超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；UV765紫外可见分光光度计（上海分析仪器厂）；FA124电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；L-3000四元低压自动进样高效液相色谱系统（上海添时科学仪器有限公司）；LC-5520高效液相色谱仪（北京东西分析仪器有限公司）；STI-501Plus等度高效液相色谱仪（赛智科技（杭州）有限公司）；SPCC-220E-国产全自动实验室洗瓶机（东莞市谱标实验器材科技有限公司）；PHS-3C型PH计（上海雷磁仪器厂）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：2-萘酚
1.4 试剂：甲醇（山东省禹城市中美色谱产品厂）、乙腈（山东省禹城市中美色谱产品厂）、三乙胺（南京科捷分析仪器有限公司）、磷酸（南京科捷分析仪器有限公司）、磷酸二氢钾（北京京科瑞达科技公司）、冰醋酸（山东省禹城市中美色谱产品厂）。
1.5 试药：头孢拉定原料
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[2-3]。流动相：乙腈-甲醇-水（45：5：50）为流动相，检测波长：225nm，流速：1.0ml·min-1。柱温：30℃。理论板数按2-萘酚峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取2-萘酚对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.05μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取供试品，精密称取，置容量中，精密加入流动相10mL，充分振摇后离心取上清液，即得。
2.4 检测限以及定量限
取2-萘酚对照品，用流动相依次稀释。以S/N=3计，检测限为 0.0002%；以S/N=10计，定量限为0.0006%。
2.5 精密度试验
精密称取2-萘酚对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.05μg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.93%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量2-萘酚对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.005、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28微克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果表明，2-萘酚在0.005～1.28μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的头孢拉定原料样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.96%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
采用加样回收法，将已知含量的头孢氨苄供试品溶液，分别加入一定量的2-萘酚，按“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.5%，RSD为0.86%。
2.9 样品稳定性试验
取同一批头孢拉定原料样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、1、2、3、4小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定头孢拉定原料中2-萘酚的RSD=0.89%。结果表明供试品4小时内稳定。
2.10 耐用性
在不同天用L-3000四元低压自动进样高效液相色谱系统及LC-5520高效液相色谱仪，分别进行实验，2-萘酚和主成分头孢氨苄峰分离良好，显示方法具有比较充分的色谱耐用性。
2.11 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定头孢拉定原料10批样品中2-萘酚的含量，结果10批样品的含量分别0.00078%、0%、0%、0.00681%、0.00081%、0%、0%、0%、0.00731%、0%。
3 讨论
分别考察甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2），乙腈-甲醇-0.05%磷酸（15：15：70），乙腈-甲醇-水（45：5：50），乙腈-甲醇-水（50：5：45），乙腈-甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氢钾-冰醋酸（20∶5：75：0.1），甲醇-0.025moLKH2PO4（15∶85）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-水（45：5：50）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-水（45：5：50）为流动相为流动相。2-萘酚有未检出和检出，检出含量差异较大说明孢拉定原料在生产过程中2-萘酚回收工艺稳定性较差。有部分生产企业用2-萘酚作为沉淀剂，将反应体系中的头孢拉定完全得到分离，但2-萘酚回收工艺稳定性较差。如不能很好的回收2-萘酚应考虑其他分离方法。
参考文献
[1]Aqueous oxytetracycline degradation and the toxicity change of degradation compounds in photoirradiation process[J]. JIAO Shaojun～1 ZHENG Shourong～1 YIN Daqiang～（2，*）WANG Lianhong～1 CHEN Liangyan～1 1.State Key Laboratoo，of Pollution Control and Resource Reuse，School of the Environment，Nanjing University，Nanjing 210093，China. 2.Key Laboratory of Yangtze Water Environment of Ministry of the State Education，Tongji University，Shanghai 200092，China. Journal of Environmental Sciences. 2008（07）.
[2]万有岳，李琼莉.高效液相色谱法测定硫酸锌电解液中的α-亚硝基-β-萘酚、β-萘酚[J].中国有色冶金，2012（03）.
[3]周建科，韩朝家，唐翠苓，王琳.固相分散萃取-液相色谱法测定番茄酱中2-萘酚[J].食品工程，2011（01）.