【摘 要】
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目的 构建携带有RNA干扰片段的腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP,探讨人类结肠癌BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP抑制血管内皮生长
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目的 构建携带有RNA干扰片段的腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP,探讨人类结肠癌BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射腺病毒载体Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP抑制血管内皮生长因子-C(VEGF-C)表达、结肠癌生长以及结肠癌淋巴管生成的效果.方法 选择针对人类VEGF-C mRNA的特异性siRNA靶序列,设计合成其相应的双链DNA,利用BamHI、HindⅢ双酶切插入pDC316-EGFP-U6载体后构建穿梭质粒pDC316-VEGF-C siRNA-EGFP-U6,再与骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,同源重组,酶切鉴定,包装扩增后得到重组腺病毒Ad5F35-VEGF-C siRNA-EGFP-U6.裸鼠皮下注射LoVo细胞构建人类结肠癌皮下移植瘤模型24只,随机分为4组(每组6只):以腺病毒、空病毒、裸siRNA以及PBS分别进行瘤内原位注射干预,计算肿瘤体积变化并绘制生长曲线,使用抗LYVE-1单抗和抗CD34单抗分别染色瘤内的血管和淋巴管,检测瘤内淋巴管和血管生成情况,计算微血管密度(MVD),微淋巴管密度(LVD).结果 腺病毒组肿瘤体积明显小于其他各组,腺病毒组与PBS对照组LVD分别为8.47±2.1,17.35±4.7(P0.05).结论 实验设计并合成的腺病毒载体介导的VEGF-C siRNA,在人类结肠癌裸鼠移植瘤模型中,瘤内注射腺病毒载体能显著抑制移植瘤的生长和肿瘤淋巴管生成,而对肿瘤血管生长无显著影响.
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