重组人胰岛素样生长因子Ⅰ的纯化及鉴定

来源 :军事医学科学院院刊 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liaodoctor
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的 :纯化在大肠杆菌中表达的重组人胰岛素样生长因子Ⅰ (rhIGF Ⅰ ) ,并对其性质进行鉴定。方法 :发酵表达菌株 ,提取包涵体 ,采用离子交换和凝胶过滤两步纯化 ,从相对分子质量、免疫学性质、荧光光谱、N端 15个氨基酸的序列分析等方面进行鉴定。另外 ,对重组蛋白进行了复性和生物学功能的检测。结果与结论 :纯化后rhIGF Ⅰ纯度可达 99%以上 ,相对分子质量、免疫印迹、荧光光谱及N端 15个氨基酸的分析结果与预计的相同 ,rhIGF Ⅰ促细胞生长的ED50 为 3~ 10ng/ml。 Objective: To purify recombinant human insulin - like growth factor Ⅰ (rhIGF Ⅰ) expressed in E. coli and identify its properties. Methods: The expressed strain was fermented and the inclusion bodies were extracted. The two strains were purified by ion exchange and gel filtration and identified from the relative molecular mass, immunological properties, fluorescence spectra and sequence analysis of 15 amino acids at the N terminus. In addition, the recombinant protein was tested for its refolding and biological functions. RESULTS AND CONCLUSION: The purity of rhIGF Ⅰ was over 99%. The relative molecular mass, immunoblot, fluorescence spectra and 15 amino acids of N terminal were the same as expected. The ED50 of rhIGF Ⅰ cell growth was 3 ~ 10ng / ml.
其他文献
用差异显示-PCR方法,从血管内皮细胞中获得一新的cDNA片段,以该片段为探针,从人主动脉cDNA文库中筛选到一个长2198bp的CDNA克隆,经DNA测序及同源性分析,发现该序列中含有与血管生成素-1FD编码区及3’端部分非翻译区完全互补的碱基,推测该克隆为体内血管生成素-1的天然反义RNA,命名为Gna-1,它不编码蛋白质.RT-PCR方法证实,Gna-1在人脐静脉内皮细胞及ECV304中有转
目的:揭示醒脑开窍针刺法治疗脑梗塞的分子机制.方法:采用分子杂交的技术,观察了实验性脑梗塞大鼠缺血区脑组织HSP70mRNA的转录水平,并观察了醒脑开窍针刺法对缺血区脑组织HS
目的构建抗汉滩病毒(HTNV)NP抗原mAb的ScFv-Cκ基因原核和真核表达载体。方法将鼠源性抗HTNVmAb1A8的ScFv基因和人Cκ基因连接,分别克隆入原核表达载体pComb3和真核表达载体pC
运用透射电子显微镜与原子力显微镜研究了紫膜样品存放过程中的结构变化.与新分离的样品相比较,存放3年以上的紫膜样品自发形成了许多脂质体.脂质体上的膜结合蛋白——细菌视
101个核心家庭的指间区纹分布状况经分析发现Ⅲ、Ⅳ区,左右手控制花纹的基因都是等位的.Ⅲ、Ⅳ区是等位的不同基因的镶嵌显性遗传.一个基因同时控制左右手对应区,不同基因表
目的 探讨血管平滑肌细胞(VSMC)转染表达血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型受体(AT2R)对其增殖和迁移的影响。方法 构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体(AdCMV-AT2R),体外转染大鼠主动脉VS
用液相合成方法合成了具有镇痛作用的μ阿片受体的内源性配体——内吗啡肽 - 1(endomorphin- 1 ) ,该四肽为 Tyr- Pro- Trp- Phe NH2 .液相合成法是在氨基酸的 N端用 Boc(叔
对白菜和芜菁的 6个杂种 F1代进行游离小孢子培养 ,结果表明 ,不同组合间小孢子胚胎发生频率存在很大差异 ,胚产量最高的两个组合“矮脚黄×气死孩”和“苏州青×气死孩”平
为探讨魟类螫伤机理,用光镜和电镜观察了光魟的毒棘腹外侧纵沟内的毒腺的组织结构。结果表明:光魟的毒腺为复层上皮。从基底面到游离面依次为基底层、棘细胞层和嗜酸性细胞层。
综述了基因打靶在对基因功能研究方法学上的进展,阐明目前已能达到在任意时刻、任意组织内剔除任意一个基因.