【摘 要】
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利用PCR扩增出植物乳杆菌p-8的乙酰乙酸脱羧酶基因,构建原核表达载体pET-28a-CLA-DC,转化Trans BL21细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot证明重组酶CLA-DC可大量表达且大部分为包涵体。在pET-28a-CLA-DC基础上将CLA-DC基因在133单位点、133和415两位点以及133、415和786 3个位点进行弱化同义突变,分别转化Tran
【基金项目】
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内蒙古自治区自然科学基金项目（2017MS0306）； 国家自然科学基金项目（31560443）；
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利用PCR扩增出植物乳杆菌p-8的乙酰乙酸脱羧酶基因,构建原核表达载体pET-28a-CLA-DC,转化Trans BL21细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot证明重组酶CLA-DC可大量表达且大部分为包涵体。在pET-28a-CLA-DC基础上将CLA-DC基因在133单位点、133和415两位点以及133、415和786 3个位点进行弱化同义突变,分别转化Trans BL21进行表达,结果显示3个同义突变体有效地提高了CLA-DC的可溶表达量;经Ni-IDA柱纯化后,CLA-DC的可溶表达量和比活力从大到小的顺序均为三位点突变体、两位点突变体和单点突变体。本研究为体外酶催化生产CLA和提高可溶性表达奠定基础。
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