【摘 要】
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本文将GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射,6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫30日龄四川白鹅,以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用免疫组织化学方法检测pcDNA-GPV-VP3在雏鹅体内表达的时相
【机 构】
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四川农业大学动物医学学院禽病防治研究中心,四川雅安 625014 动物疫病与人类健康四川省重点实验
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛
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本文将GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射,6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫30日龄四川白鹅,以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用免疫组织化学方法检测pcDNA-GPV-VP3在雏鹅体内表达的时相分布。结果表明:①pcDNA-GPV-VP3的表达产物1d时能在免疫部位中的细胞质中检测到,且量最大；②肠腺和肠绒毛上的杯状细胞细胞质,心肌细胞核3d后也能检测到较多阳性,7d数量最多；③肝细胞间质中有零星表达；④肺、肾、脾、胰腺、脑、法氏囊、胸腺中未见表达；⑤不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后表达产物在各组织器官中量呈现的总体规律为6μg组＞3μg组＞1μg组。因此,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在能在心肌细胞核,肝细胞核、肠腺和肠绒毛的杯状细胞质、免疫部位皮肤细胞质和细胞间内成功进行表达。
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运用RT-PCR技术,首次从齐口裂腹鱼(Schizthorax prenanti)脑垂体扩增出生长激素(GH)完整开放阅读框(ORF),共633 bp,编码210 aa。分子进化分析表明其与草鱼和鲤鱼GH的进化关系较近,而与人类的GH基因进化距离较远。运用PCR技术从含齐口裂腹鱼GH开放阅读框序列质粒中扩增其成熟蛋白编码基因,共564 bp。将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)后在E.c
根据GenBank中发表的斑点又尾鲴干扰素基因序列设计一对引物,采用RT-PCR在斑点叉尾鮰淋巴细胞中克隆出了α-干扰素基因。序列分析显示与已发表的序列同源性在96.5％以上。同时将基因连接到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组表达质粒,转入BL21经0.2mmol/L的IPTG诱导4小时后经SDS-PAGE分析,可见一约19KD的清晰蛋白带,用Bandscan软件分析蛋白表达量为48.4
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