目的:分离培养人脐带间充质干细胞(human Umbilical Cord MesenchymalStem Cells hUCMSCs),观察其冻存复苏后向脂肪细胞定向分化的能力。方法:将剔除动静脉的新鲜人脐带组织切成小块培养,得到贴壁细胞,观察细胞生长及检测其表面抗原。将第1代的hUCMSCs采用梯度冷冻技术冻存5个月,复苏后培养至第12代时,加入成脂诱导剂培养。当诱导至21天时行油红0染色,7天及14天时用RT-PCR技术分别检测成脂转化基因过氧化物酶增殖剂受体(PPARγ-2)和脂蛋白酯酶(LPL)。结果:组织块培养法收获的单个核细胞培养传代后,能获得均一贴壁的间充质干细胞,hUCMSCs冻存复苏后,活细胞约为86%,流式细胞仪分析这些细胞表达CD13、CD44和CD71等MSCs标志物,不表达CD14、CD34和HLA-DR表面抗原。复苏细胞在成脂诱导剂的作用下,细胞中有脂滴产生,通过油红0染色显示细胞核周围有脂滴聚集,通过RT-PCR检测有LPL及PPARγ2mRNA的表达。结论:采用组织块贴壁培养法分离获得的人脐带间充质干细胞可冷冻保存。复苏后培养至第12代仍具有向脂肪细胞分化的潜能,可作为脂肪组织工程种子细胞来源。