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胃癌是人类常见的恶性肿瘤。在全球范围内,胃癌的发病率在男性居第三位,其死亡率高居第二位。大多数患者出现临床症状就医时,已经处于晚期或出现远处转移,手术根治率低。术后无合理的化疗方案,放疗化疗效果差,毒副作用较大,术后5年存活率很低。临床上急需提高胃癌疗效的新方法。近年来,对恶性肿瘤进行了大量的研究,细胞周期的研究取得了突破性的进展。E2F-1作为Rb/E2F调控机制通路和细胞周期极其重要的转录因子;Cdx2蛋白包含311个单氨基酸,通过螺旋-环-螺旋的方式结合于DNA的相应区域以转录因子的形式调节DNA的表达。深入研究E2F-1/Cdx2在胃癌细胞中的作用及与其它肿瘤相关基因变化和相互作用的机理,不仅可以阐明E2F-1/Cdx2在胃癌中作用的机制,而且可以协助胃癌的诊断分级、为治疗提供理论依据。目的通过RT-PCR验证分析基因芯片的差异基因,进一步探索过表达E2F-1/Cdx2基因影响胃癌细胞生物学行为的作用机理。方法1.脂质体Lipofectamine 2000转染pCMV-E2F-1-HA2、pCMV-Cdx2-HA2重组载体、pCMV-HA2空载体至MGC-803胃癌细胞,分别提取转染后各组细胞的Total RNA和蛋白,采用RT-PCR和Western Blot技术验证pCMV-E2F-1-HA2、pCMV-Cdx2-HA2、pCMV-HA2质粒转入细胞内;2.抽取纯化MGC-803/E2F-1、MGC-803/Cdx2、MGC-803/HA和MGC-803细胞的Total RNA。采用逆转录的方法合成cDNA,结合普通PCR反应扩增所选差异基因的目的片段。采用凝胶成像系统灰度比值半定量的方法,获得RT-PCR的实验数据。3.通过对半定量法得到的各组数据进行统计学处理,验证分析基因芯片结果。结果1.应用RT-PCR和Western Blot分别检测到了转染后E2F-1、Cdx2在两组细胞中mRNA和融合蛋白的表达;2. RT-PCR技术验证分析得到的结果与基因芯片筛选的差异基因变化一致。结论1.成功转染了过表达E2F-1和Cdx2基因至胃癌细胞株MGC-803细胞;2. RT-PCR验证分析过表达Cdx2胃癌细胞中六条基因的结果与基因芯片筛选的差异表达基因改变一致;3. RT-PCR验证分析过表达E2F-1胃癌细胞中五条基因的结果与基因芯片筛选的差异表达基因改变一致;4. E2F-1和Cdx2基因过表达引起胃癌基因表达发生改变;这些差异表达基因通过不同生物学信号通路、途径参与了胃癌细胞增殖、生长、凋亡和侵袭转移的调节,从而影响胃癌细胞的生物学行为的改变。